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第一部分小鼠抗原特异性不成熟DC外泌体的获得及其特性目的：制备microRNA-146a过表达的抗原特异性不成熟DC,提取其外泌体,观察表型及特性。方法：首先探讨肽段Tα146-162刺激能否改变小鼠不成熟DC的成熟度,应用流式细胞学技术检测DC表面MHC Ⅱ、CD80、CD86的表达,ELISA检测培养细胞上清液中IL-6和IL-12细胞因子的表达。接着,应用化学转染试剂,将microRNA-146a mimics转染入小鼠DC中,比较转染和未转染microRNA-146a mimics的DC抵抗肽段Tα146-162成熟刺激的能力。选取能够抵抗肽段Tα146-162刺激的抗原特异性不成熟DC,大量培养并收集上清液提取其来源的外泌体,电镜观察外泌体形态大小,流式细胞技术观察外泌体表面分子MHCⅡ、CD80、CD86的表达情况,为下一步将外泌体应用于实验性自身免疫性重症肌无力的治疗做准备。结果：小鼠不成熟DC经肽段Tα146-162刺激后表面MHCII, CD80, CD86表达增多,上清液中IL-6、IL-12水平升高；经microRNA-146a mimics转染的DC能抵抗Tα146-162的成熟刺激,转染组DC表面MHC Ⅱ、CD80、 CD86百分比和平均荧光强度均较未转染组降低,且转染组上清液中IL-6、IL-12水平较未转染组降低；经nicroRNA-146a mimics转染DC来源的外泌体表面CD80、CD86明显低于未转染microRNA-146a mimics的DC来源的外泌体。结论：成功制备microRNA-146a mimics诱导的抗原特异性不成熟DC来源外泌体,它表面低表达CD80、CD86共刺激分子,这为进一步将microRNA诱导的不成熟DC来源外泌体用于自身免疫性疾病治疗奠定了基础。第二部分抗原特异性不成熟DC来源外泌体对实验性自身免疫性重症肌无力的治疗作用及免疫调节机制目的：探讨抗原特异性不成熟DC来源外泌体对实验性自身免疫性重症肌无力的治疗作用及免疫调节机制。方法：①髓源不成熟DC和AChR反应性CD4+T淋巴细胞共培养并给予肽段Tα146-162刺激,在培养体系中分别加入Tα146-162-imDex, Tα146-162-mDex,并设立PBS组为阴性对照。CFSE检测CD4+T细胞增殖能力,ELISA检测培养上清液中IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17的水平。②提取电鳗AchR蛋白,制备小鼠EAMG模型。③以第0、30、60天分别皮下注射(T-AChR+CFA)抗原乳剂免疫C57BL/6小鼠的方法诱导EAMG动物模型。距初次免疫70天选取EAMGI临床评分达1-2分的C57BL/6小鼠随机分为治疗组和治疗对照组。治疗组静脉注射Ta146-162-imDex,根据剂量不同分为2ug、5ug和10ug组,每组6只。治疗对照组于入组同一天注射Tα146-162-mDex,每组6只。入组后隔天进行临床评分。④入组后第20天,取静脉血用ELISA方法检测抗AChRIgG、IgG1、IgG2b、IgG2c滴度。同时ELISA检测血清中IL-17、 IFN-γ、IL-4、IL-10水平。⑤入组后第21天处死小鼠,取脾细胞用CFSE和CD4双标法检测T淋巴细胞增殖反应,ELISA检测IL-17、 IFN-γ、IL-4、IL-10水平,Western blot检测Th17、Th1、Th2、Treg细胞相应特异转录因子RORyt、T-bet、GATA-3、FoxP3表达水平。⑥实验终止时,取治疗组和对照组小鼠脾脏淋巴结培养,分别加入Tα146-162、T-AchR、PBS和conA。CFSE法检测CD4+T细胞的增殖情况。结果：①与Tα146-162-mDex相比,Tα146-162-mDex在第五天能使AChR反应性CD4+T细胞呈现低增殖反应,在培养上清液中IL-17、IFN-γ水平显著降低,而IL-4、IL-10水平显著增高。②与Tα146-162-mDex对照组相比,静脉注射不同剂量的Tα146-162-imDex均能降低EAMG小鼠的平均临床评分,及血清抗AChR、IgG1、IgG2b水平。Ta146-162-imDex治疗组小鼠血清IL-4、IL-10水平较高,而IFN-γ和IL-17水平降低。③与Tα146-162-mDex治疗组相比,Tα146-162-imiDex治疗组脾淋巴细胞增值反应显著降低,Th17细胞标志物(IL-17, RORyt)和Thl细胞标志物(IFN-γ, T-bet)显著减低,Th2细胞标志物(IL-4, GATA3)、Treg细胞标志物(FoxP3)水平显著增高。④在无抗原及对照抗原ConA存在时,Tα146-162-mDex对照组脾脏CD4+T细胞呈现低增殖反应；在T-AChR及Tα146-162存在时,AChR反应性CD4+T细胞呈现高增殖反应；与Tα146-162-mDex治疗组脾脏淋巴细胞培养体系相比,Tα146-162-mDex治疗组中脾脏淋巴细胞培养体系中CD4+T细胞增殖反应显著降低。结论：抗原特异性不成熟DC来源外泌体可以有效减轻实验性自身免疫性重症肌无力的肌无力程度及病理性自身抗体水平,其治疗效果是呈抗原特异性和部分剂量依赖性的,其机制与外泌体减轻CD4+T淋巴细胞增殖反应、调整Th细胞由Th17、Th1向Treg极化有关。