黑尾叶蝉转录组分析以及精氨酸激酶和谷胱甘肽转移酶的克隆

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shanyuqi0513
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黑尾叶蝉(Vephotettix cincticeps)属于半翅目,叶蝉科。它是一种主要分布在长江中上游和西南各省的水稻害虫,同时能够传播水稻黄矮病,水稻纹枯病等水稻病害,这些病害一旦暴发将对水稻产量造成极大的危害。本研究中,我们以利用RNAi技术培育抗虫水稻为目标,对黑尾叶蝉的转录组进行了高通量测序和生物信息学研究,其结果如下。转录组数据分析转录组一共得到27,777,050个reads,利用转录组专用拼接软件Trinity拼接得到unigene81,225条,平均长度445bp。其中36,668条序列经比对找到同源基因(E<0.00001),另有9655条序列利用软件ESTScan预测到了CDS。在转录组数据中我们发现了预测为丝氨酸蛋白酶、α-淀粉酶等的消化相关蛋白;PRGP、GNP在内的免疫相关蛋白;RNAi途径必须蛋白和一些看家基因的unigene,这些unigene都可以作为潜在的抗虫靶标基因。为初步了解相关基因在黑尾叶蝉消化系统中的作用,我们利用real-time PCR检测了其在中肠和马氏管的表达情况。相关基因克隆和发育特征研究我们克隆得到了黑尾叶蝉精氨酸激酶(NcAK,Nc是黑尾叶蝉的拉丁文名缩写)和一个delta类型的谷胱甘肽-S-转移酶基因(NcGST, Nc是黑尾叶蝉的拉丁文名缩写)的CDS序列,并对两个基因进行了序列分析和表达特性检测。结果表明,NcAK的CDS包含的开放阅读框为1068bp,编码一个的356aa的蛋白。该序列与玻璃翅叶蝉Homalodisca vitripennis)的氨基酸序列一致性达到97%,在黑尾叶蝉的卵和1龄若虫,5龄若虫,雌雄成虫中皆有表达,在雄虫中表达量最高。NcGST的开放阅读框由651个碱基组成,编码217个氨基酸,与美国牧草盲蝽(Lygus lineolaris)GST氨基酸序列一致性为74%。NcGST在5龄若虫和雌雄成虫中的表达量要高于在卵和1龄的表达量。
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