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目的:通过研究愈障Ⅱ号方及其拆方配伍对再障模型小鼠骨髓造血细胞PTEN/AKT/m TOR信号转导通路的影响,探讨愈障Ⅱ号方治疗再障的作用机制及拆方配伍意义。方法:SPF级BALB/c雌性小鼠75只,随机选取15只为空白组,其余采用乙酰苯肼、X射线及环磷酰胺复制再障小鼠模型,再障造模成功后按体质量随机分为模型组、全方组、补肾组及调和肝脾组,并采用束缚制动加控制饮食法建立肝郁脾虚模型,同时全方组、补肾组及调和肝脾组小鼠给予中药灌胃,模型组小鼠给予等量生理盐水灌胃。实验期间观察小鼠一般状态,检测小鼠外周血细胞计数。灌胃16d后取材,观察血细胞、骨髓细胞形态,行骨髓病理;流式细胞术检测骨髓单个核细胞中CD45~+CD117~+造血干细胞比例及骨髓单个核细胞凋亡率;RT-PCR法检测骨髓单个核细胞中PTEN、AKT、m TOR m RNA表达;Western blot法检测骨髓单个核细胞中PTEN、p-PTEN、AKT、p-AKT、m TOR、p-m TOR、p-P70S6K、p-4E-BP1表达。结果:1.愈障Ⅱ号方能显著改善再障小鼠的一般状态,全方组明显优于拆方组(P<0.01)。补肾组对再障小鼠行为状态、大便状态的改善作用优于调和肝脾组(P<0.05),调和肝脾组对再障小鼠情绪反应、饮食状态的改善作用优于补肾组(P<0.05)。2.愈障Ⅱ号方能显著提高再障小鼠外周血细胞计数,全方组明显优于拆方组(P<0.01)。补肾组对再障小鼠白细胞、红细胞及血红蛋白的提升作用优于调和肝脾组(P<0.05),调和肝脾组对再障小鼠血小板的提升作用优于补肾组(P<0.05)。3.愈障Ⅱ号方能改善再障小鼠的血象、骨髓象及骨髓病理,全方组优于拆方组,两拆方组作用多有相似又各有侧重。4.愈障Ⅱ号方能显著提高再障小鼠骨髓造血干细胞比例,全方组明显优于拆方组(P<0.01),补肾组优于调和肝脾组(P<0.05)。5.愈障Ⅱ号方能显著降低再障小鼠骨髓造血细胞早期凋亡率,全方组明显优于拆方组(P<0.01),补肾组优于调和肝脾组(P<0.05)。6.RT-PCR法检测发现,愈障Ⅱ号方能上调AKT m RNA、m TOR m RNA表达,全方组明显优于拆方组(P<0.01),补肾组优于调和肝脾组(P<0.05)。7.经Western Blot检测发现,愈障Ⅱ号方能下调PTEN及p-PTEN表达,上调p-Akt、p-P70S6K、p-4E-BP1表达,全方组明显优于拆方组(P<0.01),调和肝脾组优于补肾组(P<0.05)。结论:1.愈障Ⅱ号方能够改善再障模型小鼠的一般状态,提升再障小鼠外周血细胞计数,改善其血象、骨髓象及骨髓病理。2.愈障Ⅱ号方能够显著提高再障模型小鼠骨髓造血干细胞比例,抑制骨髓造血细胞凋亡。3.愈障Ⅱ号方能激活再障模型小鼠骨髓造血细胞被抑制的PTEN/AKT/m TOR信号通路,促进造血细胞的增殖,抑制造血细胞的凋亡,从而改善骨髓造血功能。4.补肾组与调和肝脾组对骨髓造血干细胞比例、造血细胞凋亡率与m TOR信号通路活性影响方面多有相似又各有侧重,提示愈障Ⅱ号方对再障的治疗作用是多环节、多靶点的,PTEN/AKT/m TOR信号通路是影响骨髓造血细胞增殖、凋亡的重要因素之一。5.拆方研究表明,补肾组疗效优于调和肝脾组,两拆方组是一种协同作用,证实了愈障Ⅱ号方补肾药与调和肝脾药配伍的合理性,验证了中医“肾主骨生髓”及“肝肾同源,精血互化”的理论。