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萍乡红鲫(Pingxiang red-transparent crucian carp, Carassius auratus var. Pingxiangnensis)是分布在江西省萍乡地区的天然三倍体鲫突变体,经人工选育后获得的遗传性状基本稳定的后代,具有两性生殖和雌核发育两种生殖方式。Hir/Hira基因是一种组蛋白基因表达负调节因子,其产物HIR/HIRA作为组蛋白的伴侣蛋白,广泛存在于多种生物体内发挥不同的作用。HIRA蛋白家族最显著的特点是氨基酸序列N端存在7个高度同源的WD40结构域,此结构域常介导蛋白质之间的相互作用,参与多种细胞功能的调节,在信号转导、蛋白运输、染色体修饰、转录或RNA加工、细胞凋亡等过程中具有重要作用。另据报道称Hira基因可能对鱼类精核解凝发挥重要作用。因此,本研究以萍乡红鲫为材料,对Hira基因在三倍体鱼类中基因构成及表达特征进行了初步探索,为研究该基因在生殖发育过程中的作用打下基础。主要内容如下：1.采用SMART cDNA合成和RACE-PCR等技术,克隆得到全长cDNA序列,长度为3851bp,包含一个3033bp的开放阅读框,编码1010个氨基酸。为提交和查阅序列方便,将此序列命名为C.auratus var.Pingxiangnensi-HIRA(简写为Cavp-HIRA),并提交到NCBI录入GenBank中,登录号为HM067834。另外,通过生物软件分析,发现萍乡红鲫Hira基因与银鲫Hira基因在进化分类上存在较高的同源性,并且在其推导氨基酸序列N端包含7个WD40区,因而推定萍乡红鲫HIRA属于HIRA蛋白家族。2.利用荧光定量PCR技术检测了Hira基因在萍乡红鲫心、肝、脾、肾、脑、肌肉、精巢、卵巢等组织中的表达情况,结果发现该基因在卵巢中大量表达,而在其余组织中存在少量表达或是不表达的情况,与所做的RT-PCR结果基本吻合。3.在克隆得到的序列开放阅读框内,选取了一段长550bp的保守结构域进行了蛋白原核表达,用亲和层析法纯化了表达产物,利用紫外吸收差法测定纯化蛋白浓度,并将其作为抗原免疫家兔,成功制备了多克隆抗体,以便用于后期免疫荧光组织化学等实验。本研究为萍乡红鲫Hira基因在鱼类遗传发育方向的研究打下基础。