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一、研究背景急性肺损伤(acute lung injury, ALI)是大面积深度烧伤患者最常见的并发症之一，特别是在合并吸入性损伤、休克、延迟复苏等情况下更易发生。它导致机体缺氧，作用于机体各个器官、系统，造成组织、细胞坏死和功能障碍，继而出现多器官功能障碍综合症（Multiple Organ Dysfunction Syndrome, MODS），引起死亡。目前已经明确：炎症反应失控所导致的弥漫性肺泡毛细血管损伤是ALI的主要病理基础。高迁移率族蛋白B1（High mobility group box1，HMGB1）是一种广泛存在高度保守的DNA结合蛋白，在DNA重组、修复、复制和基因转录中起重要作用。近年研究表明，在炎症和创伤等因素的作用下，固有免疫细胞会主动分泌HMGB1，机体坏死细胞也被动释放HMGB1，作用于单核/巨噬细胞、内皮细胞和中性粒细胞等，诱导其合成并分泌其它炎症介质。HMGB1被认为既是炎症早期的启动者，又是炎症晚期的促进者。目前有关HMGB1在严重烧伤后急性肺损伤发生中的作用如何，尚不明确。本实验采用严重烫伤延迟复苏大鼠为主要研究对象，动态观察急性肺损伤时肺组织中HMGB1的表达规律，并使用HMGB1抑制剂正丁酸钠进行干预，观察血清及肺泡灌洗液中促炎性细胞因子TNF-α和趋化因子IL-8的变化以及肺脏MAPK信号转导通路的活化情况，以了解HMGB1在严重烫伤延迟复苏急性肺损伤中的作用和机制，以进一步认识烧伤后急性肺损伤的发生机制并为其防治提供新的思路和方法。二、研究目的1.探讨HMGB1在严重烧伤延迟复苏大鼠急性肺损伤中的作用；2.研究HMGB1在严重烧伤延迟复苏大鼠急性肺损伤中作用的初步机制。三、研究内容第一部分HMGB1在严重烧伤延迟复苏大鼠急性肺损伤中的作用健康成年雌性Sprague-Dawley大鼠56只，体重200-250g，，由安徽医科大学实验中心提供。常温下饲养一周，随机分为正常对照组（8只）、烧伤延迟复苏组（24只）和烧伤延迟复苏+正丁酸钠组（24只）。致伤前大鼠腹腔注射3%戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉，烧伤组大鼠用恒温水烫仪以98°C水烫背部12s，造成大鼠30%TBSA Ⅲ°烧伤（病理证实）。烧伤延迟复苏组大鼠伤后6h、12h、36h以2ml·/(kg TBSA)给予乳酸林格氏液腹腔注射进行液体复苏。正丁酸钠（Sigma-Aldrich公司，美国）用乳酸林格氏液稀释成1:150，烧伤延迟复苏+正丁酸钠组以相同的时间点和途径给予等量含正丁酸钠的乳酸林格氏液，即正丁酸钠每次剂量为400mg/kg。烧伤大鼠分别于伤后12h、24h和48h经心脏取血后处死，行支气管肺泡原位灌洗，ELISA法测定血清和支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolarlavage fluid，BALF）中TNF-α和IL-8含量，同时测定肺脏含水量，作肺脏病理学检查和HMGB1表达检测（Western blot法），并观察肺组织细胞间粘附分子1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）蛋白表达的差异（免疫组化法）。正常对照组大鼠进行相同的麻醉，用室温水浴模拟烫伤过程，不进行液体复苏，行相同的指标检测。第二部分HMGB1对严重烧伤延迟复苏大鼠肺脏氧化损伤的作用和机制动物分组和烧伤模型以及烧伤后处理同第一部分，烧伤大鼠分别于伤后12h、24h和48h经心脏取血处死，留取肺脏，一部分制成匀浆，化学比色法检测髓过氧化物酶（MPO）活性和丙二醛（MDA）含量，另一部分行免疫组化检测p38MAPK和JNK的表达。正常对照组大鼠处理也同第一部分。四、研究结果第一部分大鼠30%TBSAⅢ°烧伤延迟复苏后肺脏含水量明显上升，烧伤延迟复苏组烧伤后12h、24h和48h肺脏的含水量分别为（78.29±2.83）%、（84.60±3.55）%和（81.81±4.58）%，组织病理学检查显示：肺脏出现明显的病理损害，采用病理评分，烧伤延迟复苏组大鼠烧伤后12h、24h和48h肺脏的病理评分均显著高于正常对照组（3.9±0.8,6.1±1.2,8.6±1.7vs0.5±0.5，P=0.000）。同时血清和肺泡灌洗液TNF-α和IL-8含量显著升高，肺脏HMGB1和ICAM-1的表达显著增强。使用正丁酸钠能抑制肺脏HMGB1表达的上升，同时大鼠肺脏含水量下降，烧伤延迟复苏+正丁酸钠大鼠伤后12h、24h和48h肺脏含水量分别为（74.94±2.20）%、（75.90±3.55）%和（77.98±8.68）%，肺脏的病理损害显著减轻，烧伤延迟复苏+正丁酸钠大鼠肺脏烧伤后12h、24h和48h的病理评分分别为2.6±0.9、2.8±0.8和3.3±0.7，明显低于同时间点的烧伤延迟复苏组（P均<0.01），同时血清和肺泡灌洗液TNF-α和IL-8含量下降，肺脏ICAM-1的表达降低。第二部分大鼠30%TBSAⅢ°烧伤延迟复苏后肺脏MPO活性和MDA含量明显上升，免疫组化结果显示：肺脏p38MAPK和JNK明显活化。使用HMGB1抑制剂正丁酸钠能显著抑制烧伤后肺脏MPO活性和MDA含量的升高，烧伤延迟复苏+正丁酸钠24h和48h组肺脏MPO活性和MDA含量均显著低于同时间点的烧伤延迟复苏组(P均<0.05)，同时肺脏p38MAPK和JNK表达下降。五、研究结论HMGB1通过活化p38MAPK和JNK信号转导通路，介导了肺脏促炎性细胞因子TNF-α、趋化因子IL-8、黏附分子ICAM-1的产生和中性粒细胞的活化以及脂质过氧化损伤，并由此参与了严重烧伤延迟复苏急性肺损伤的发生。