暴马丁香小枝中紫丁香苷和橄榄苦苷的分离纯化工艺研究

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本文以药用植物暴马丁香小枝为原料,采用微波预处理离子液体-锂盐超声辅助从暴马丁香小枝中提取紫丁香苷和橄榄苦苷。采用响应面法对微波预处理阶段和超声辅助提取阶段的提取工艺进行优化,采用大孔树脂对离子液体-锂盐提取液中的紫丁香苷和橄榄苦苷进行富集纯化研究。其主要内容如下:1.建立了高效液相色谱法检测紫丁香苷和橄榄苦苷的方法,色谱条件为:检测波长为:232 nm;流动相组成及比例:甲醇:0.5%磷酸=40:60;色谱柱:Kromasil C18(5μm,4.6 mm × 250 mm),流速:1.0 mL/min,进样量10μL,柱温:室温(25℃),等度洗脱40 min。紫丁香苷、橄榄苦苷在测定的范围内,线性关系良好。2.利用微波预处理离子液体-锂盐超声辅助提取紫丁香苷和橄榄苦苷,采用响应面法对提取工艺条件进行了优化。考察了不同离子液体的种类、用量,锂盐的种类、用量,微波预处理的温度、时间,超声提取的功率、时间、料液比对紫丁香苷和橄榄苦苷得率的影响。确定了最佳的提取条件:最佳的提取溶剂[C4mim]Br和LiCl,[C4mim]Br用量是11.76 mmol,LiCl的用量是77 mg,微波预处理温度是95℃,时间是1.5 min。超声功率为228 W,料液比为1:20,超声提取时间为13 min,紫丁香苷和橄榄苦苷的总得率为6.21 mg/g。3.利用大孔树脂对离子液体-锂盐提取的紫丁香苷和橄榄苦苷的富集纯化工艺参数进行了研究。通过对比这11种大孔树脂:HPD600、DM130、ADS-7、HPD100B、ADS-17、HPD417、HPD-400A、HPD-300L、D101、HPD80、HPD750 对紫丁香苷和橄榄苦苷的吸附和解析能力,筛选出HPD100B是对紫丁香苷和橄榄苦苷的富集和分离最理想的树脂。确定了大孔树脂HPD100B的最佳吸附参数,最佳上样量为200 mL,上样流速为2 BV/h,吸附温度为25℃。饱和吸附量紫丁香苷为4.03 mg/g,橄榄苦苷为70.32 mg/g。确定了大孔树脂HPD100B的最佳解析参数。分别用20%的乙醇和40%的乙醇梯度洗脱紫丁香苷和橄榄苦苷,先用20%的乙醇洗脱紫丁香苷收集6 BV,再用40%的乙醇洗脱橄榄苦苷可收集10 BV。紫丁香苷和橄榄苦苷能够分别从树脂上洗脱下来。洗脱流速为1 BV/h。经计算紫丁香苷的纯度为1.2%,橄榄苦苷的纯度为10%。利用微波预处理离子液体和锂盐,超声辅助完全打破植物细胞壁,从而使目标产物从细胞内溶出,并利用大孔树脂对目标产物进行富集分离以提高其纯度。此方法快速、有效、成本低。经查阅国内外文献,无相同报道。
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