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目的:观察健脾化瘀方对人肺癌细胞株A549增殖的抑制作用、凋亡的作用及其对凋亡、炎症氧化应激相关基因的调节表达的影响;建立对C57BL/6小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤模型,并观察健脾化瘀方对移植瘤生长曲线,移植瘤大小的影响及对C57BL/6小鼠免疫相关因素,脾指数、胸腺指数的影响,及血清中炎症相关因子表达的影响。 方法:(1)通过 MTT法,观察不同浓度、不同时间健脾化瘀方作用于人肺癌A549细胞和鼠肺癌Lewis细胞增殖的抑制作用。(2)通过 Annexin-V/PI双染色法,运用流式细胞仪检测研究不同浓度健脾化瘀方对人肺癌细胞株A549凋亡的诱导作用。(3)通过荧光显微镜观察经Hoechst33342的核染色后健脾化瘀方对于人肺癌细胞A549作用后的细胞凋亡形态变化,证实其凋亡的发生。(4)通过使用Real-time PCR方法检测健脾化瘀方作用于 A549细胞对凋亡相关基因 Survivin,Bcl-2,β-catenin、BAX的 mRNA表达的影响;炎症以及氧化应激相关基因IL-1β、TNF-α、Nrf2、HO-1、Twist的mRNA表达的影响。(5)通过使用Western Blotting方法检测健脾化瘀方作用A549细胞后炎细胞因子MCP-1,IL-6, TGF-β1,以及细胞粘附分子 ICAM-1和核因子 NF-κB蛋白表达的影响。(6)通过建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤模型,观察健脾化瘀方对C57BL/6小鼠皮下移植瘤瘤体体积,瘤生长曲线的影响,荷瘤鼠的胸腺指数,脾指数的影响。(7)运用ELISA检测对荷瘤小鼠血清中炎性相关因子的表达的影响。 结果:体外实验中健脾化瘀方(1、2、4 mg/mL)能明显抑制A549细胞增殖并呈浓度依赖性,通过 Annexin V/PI流式细胞仪和 Hoechst33342染色结果表明,健脾化瘀方能够诱导细胞凋亡,引起A549细胞核变化使得细胞核固缩,DNA和染色质缩合和碎裂。通过 Real-time PCR方法检测健脾化瘀方作用于 A549细胞诱导其凋亡的可能机制与下调Survivin,Bcl-2,β-catenin;上调BAX基因的mRNA表达有关;能够下调细胞中 IL-1β、TNF-α、Nrf2、HO-1、Twist炎症以及氧化应激相关基因的 mRNA表达。通过 Western blotting免疫印迹分析表明,能够使得A549细胞中炎细胞因子 MCP-1, IL-6, TGF-β1,以及细胞粘附分子ICAM-1和核因子 NF-κB的表达显著降低。体内实验研究健脾化瘀方能够通过免疫作用抑制了Lewis肺癌C57BL/6小鼠肿瘤生长。健脾化瘀方对C57BL/6小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤有显著的抑制作用,能够显著抑制小鼠肿瘤的体积、重量增长,高中低剂量健脾化瘀方的抑制率分别为:64.48±8.9％,54.12±17.72％,27.73±10.31％。除此之外,健脾化瘀方能够显著升高胸腺、脾脏指数。 ELISA检测显示健脾化瘀方能够显著降低荷瘤鼠血清中炎症因子TNF-α、IL-8和IL-10的水平。研究结果表明,健脾化瘀方能够诱导非小细胞肺癌的肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与相关的炎症反应改善免疫系统有关。 结论:健脾化瘀方可明显抑制肺癌细胞的增殖,并能够诱导A549细胞凋亡其可能机制为调控凋亡、炎症相关基因,以及下调炎症细胞因子MCP-1,IL-6和TGF-β1水平,细胞核因子NF-κB的蛋白表达,以及细胞粘附分子 ICAM-1的表达有关。健脾化瘀方对 C57BL/6小鼠 Lewis肺癌皮下移植瘤有显著的抑制作用,并提高了小鼠的胸腺指数,脾指数;降低了小鼠血清中炎性细胞因子TNF-α, IL-8和 IL-10水平,其对移植瘤抑制作用可能与通过免疫调节炎症细胞因子有关。