泸州为推动当地特色道地药材产业发展,将道地名贵药材金钗石斛列为重点开发对象。金钗石斛具有抗肿瘤、抗衰老、调节机体免疫力、抗疲劳、有效减轻肝损伤、抗白内障等多重功效,常用作保健品的主要成分。本课题组拟以泸州道地药材金钗石斛为主要原料,伍用人参、枸杞、龙眼肉、大枣组方,研制一种主要具有调节机体免疫力功能和缓解体力疲劳功效的养生保健酒。本研究主要分三个部分:一是比较泸州金钗石斛与已获得原产地域产品保护的赤水金钗石斛中主要有效成分石斛碱含量的差异,从而为泸州金钗石斛的质量和本保健酒金钗石斛原药材的筛选提供依据;二是对金钗石斛保健酒制备工艺进行研究,主要从样品的性状、有效成分(石斛碱、人参总皂苷)含量和药理作用(调节机体免疫力功能)等方面进行考察,初步优选出最佳制备工艺;三是评价以最佳工艺制备的酒液样品在缓解体力疲劳功效方面的作用。主要研究结果如下:1、泸、赤两地金钗石斛中石斛碱含量差异的比较研究分别采集泸州金钗石斛样品16批、赤水金钗石斛13批。按照《中国药典》(2010版)一部金钗石斛含量测定项下方法,采用气相色谱法,以石斛碱为指标,对泸、赤两地,不同生长年限(2年生～5年生),不同栽种环境(树生和石生)金钗石斛样品中石斛碱含量进行测定和比较。结果发现:(1)泸、赤两地金钗石斛中石斛碱含量差异不大(RSD值≤8.75%);(2)生长年限越长石斛碱含量越高(2、3、4、5年生金钗石斛中石斛碱含量平均值分别为0.28%、0.53%、0.68%、0.71%),但随着生长年限的增加石斛碱含量增长速度越来越慢;(3)所测样品中2年生金钗石斛中石斛碱含量范围为0.22%～0.38%;3～5年生金钗石斛中石斛碱含量范围为0.40%～0.76%。根据《中国药典》(2010年版)金钗石斛含量项下规定金钗石斛中石斛碱含量不得低于0.4%要求,故拟定以3～5年生金钗石斛作为本保健酒中金钗石斛的原药材。2、金钗石斛保健酒制备工艺的研究(1)从有效成分(石斛碱、人参总皂苷)含量考察制备工艺以有效成分含量(石斛碱、人参总皂苷)、出膏率、性状为评价指标,首先设计正交试验对水煎提取工艺中加水倍数、煎煮时间、煎煮次数进行考察;其次分别以浓香型粮食酒为基酒,采用调配法制得样品A,以浓香型粮食酒为基酒,采用醇沉法制得的酒液样品B,以清香型粮食酒为基酒,采用醇沉法制得的酒液样品C,对调配工艺中调配方法(调配法和醇沉法)和基酒类型(浓香型粮食酒和清香型粮食酒)加以考察,结果以样品B中有效成分含量与出膏率综合评分最高。(2)从药理作用(调节机体免疫力功能)考察制备工艺以A、B、C三种酒液样品作为试样,分别设高剂量组(1.92g生药/kg)、低剂量组(0.96g生药/kg)、阳性对照组(转移因子胶囊0.1mg/ml)、基酒对照组和空白对照组,测定小鼠体重、免疫器官重量和血清溶血素,结果样品A、B、C高、低剂量组均能升高免疫器官脾与胸腺指数,提高血清溶血素水平,对小鼠的免疫功能具有显著调节作用(P<0.05),其中以B酒液样品作用最强(P<0.01)。(3)综上,从样品的性状、有效成分(石斛碱、人参总皂苷)含量和药理作用(调节机体免疫力功能)等方面考察结果,初步优选出最佳制备工艺(即B酒液样品制备工艺),即取处方全部药材,加8倍量水,浸泡1小时后,煎煮3次,每次45分钟,合并煎液,滤过,滤液浓缩至适量,加浓香型粮食酒至含醇量为36%,冷藏静置24小时,滤过,加含醇量为36%的浓香型粮食酒至1000ml,即得。其性状为浅黄棕色至红棕色澄清透明液体,无肉眼可见杂质,具本品特有滋味和香味。3、评价以最佳工艺制备的酒液样品(即样品B)在缓解体力疲劳功效方面的作用以金钗石斛酒液样品B为试样,设低剂量组(0.48g生药/kg)、中剂量组(0.96生药/kg)、高剂量组(1.92g生药/kg)、阳性对照组(转移因子胶囊0.1mg/ml)、基酒对照组和空白对照组,进行小鼠负重游泳实验、肝糖元实验、血清尿素氮实验和血乳酸实验,结果样品低、中、高剂量组和阳性对照组均能延长小鼠负重游泳时间,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);样品低、中、高剂量组和阳性对照组均能显著降低小鼠血清尿素水平,升高肝糖原含量,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);样品低、中、高剂量组和阳性对照组的全血乳酸水平和血乳酸曲线下面积显著低于对照组(P<0.05或P<0.01),与阳性对照组无显著性差异。说明此最佳工艺制备的酒液样品B具有明显缓解体力疲劳的功效。综上,本研究所确立的金钗石斛养生保健酒制备工艺方法合理可行,研究结果为后期中试放大生产和药理学实验提供了方法和依据,为金钗石斛养生保健酒的成功研制奠定了基础。金钗石斛养生保健酒的成功研制,必将有力推动泸州金钗石斛产业的发展,对促进地方经济具有重要意义。