原发性肝癌为我国常见的恶性肿瘤之一，其死亡率在消化系统恶性肿瘤中列第三位，仅次于胃癌和食管癌。对无法手术的晚期肝癌，寻求有效的药物进行综合治疗以改善预后，提高生活质量十分必要。目前主要的化疗药物均为细胞毒药物，毒副反应大，人体耐受性差。因此研究非细胞毒的抗癌药物已成为当前研究的热点之一。大豆异黄酮（soybean isoflavones）是大豆中重要的非营养成分，它主要包括以糖苷结合形式存在的染料木黄酮苷（genistin）和黄豆苷（daidzin）。大豆经加工，微生物发酵或体外水解作用，染料木黄酮苷和黄豆苷的糖苷配基脱离，释放出游离形式的三羟异黄酮（4’,5,7-三羟基异黄酮，染料木黄酮，genistein）和二羟异黄酮（黄豆苷元，daidzein），这两种形式的异黄酮可被肠道有效吸收，研究发现，大豆异黄酮具有抗癌作用，对人乳腺癌细胞株，前列腺癌细胞株，胃癌细胞株，垂体瘤细胞株等具有体外抗癌作用，是一种潜在的肿瘤化学预防剂，具有广阔的开发应用前景。目前关于大豆异黄酮抗癌的实验研究主要是围绕三羟异黄酮来进行的，研究还发现，三羟异黄酮不仅存在于大豆中，还存在于各种蔬菜和水果等植物饮食中。作为一个很有潜力的抗肿瘤物质，三羟异黄酮的作用机制主要包括：①抑制蛋白酪氨酸激酶（PTK）活性，可阻抑PTK引起的受体磷酸化和有丝分裂的信号传递，导致癌细胞<WP=4>增殖受抑；②弱雌激素作用：可通过与体内雌激素受体结合，并可增加细胞内性激素结合球蛋白的合成，增加UDP-葡糖醛酸转移酶的活性等途径抑制乳腺癌和前列腺癌细胞活性；③拓扑酶Ⅰ和Ⅱ抑制剂，抑制细胞活性；④上调细胞周期性负性调节因子P21WAF1/CIP1的表达，使之负性调节因子作用增强；⑤可阻止胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）、肝细胞生长因子（HGF）和神经生长因子（NGF）的作用而抑制肿瘤生长；⑥其他：抗氧化作用、抑制热休克蛋白、诱导细胞凋亡、抑制新生血管生成和抑制多种耐药相关蛋白（MRP）等。迄今为止，三羟异黄酮抗癌的动物实验及体外研究资料较多，三羟异黄酮在体外能抑制多种人肿瘤细胞（如结肠癌、前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌等）的生长，使细胞生长周期停留在G2-M期，诱导人乳腺癌细胞分化和促进凋亡，在体内实验中能抑制肿瘤细胞增殖和新生血管形成，抑制肿瘤生长和转移，能显著降低被诱导分化的人乳腺癌细胞的致瘤作用，并能延长接种人乳腺癌细胞的SCID小鼠的存活期，对肿瘤的生长和转移均显示出良好的治疗作用。但三羟异黄酮与肝癌的作用研究甚少，经文献检索目前国内尚无此研究报道。因此，本研究旨在通过体外肝癌细胞培养，研究三羟异黄酮对肝癌细胞增殖抑制及凋亡的诱导作用。目的：探讨三羟异黄酮对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响方法：应用体外SMMC-7721细胞培养技术，采用MTT，集落形成实验测定SMMC-7721细胞增殖；采用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率；通过透射电镜和TUNEL染色法定<WP=5>性和定量地研究三羟异黄酮与肝癌细胞凋亡的关系；通过免疫细胞化学法检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果：⑴三羟异黄酮对SMMC-7721细胞增殖的作用：MTT法结果表明在24h时三羟异黄酮对SMMC-7721细胞的增殖的抑制不明显，低浓度时甚至有促进增殖的作用，当培养时间延长至48h时，逐渐出现抑制作用，且浓度越高，时间越长，抑制作用越强。集落形成实验结果表明2.5-10μg.ml-1 三羟异黄酮对集落形成均有抑制作用，且随剂量增加，抑制作用增加。⑵三羟异黄酮对SMMC-7721细胞周期的作用：流式细胞仪结果显示2.5-10μg.ml-1的genistein作用48h后，G2-M期细胞逐渐增多，呈剂量依赖性，但当genistein浓度大于10μg.ml-1 时G2-M期细胞减少，与对照组相比出现了明显的亚二倍体凋亡峰。⑶三羟异黄酮对SMMC-7721细胞凋亡的作用：透射电镜下可见经药物处理的肿瘤细胞出现典型的凋亡细胞形态如细胞染色质致密浓缩，或聚集于核膜呈新月形小体；TUNEL染色法检测经10、20μg.ml-1的三羟异黄酮处理48小时后，细胞凋亡数明显增加；免疫细胞化学法结果表明5-10μg.ml-1 三羟异黄酮均能下调bcl-2蛋白表达，上调bax蛋白的表达。结论：体外细胞培养研究表明，三羟异黄酮可以抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的增殖，诱导G2-M期阻滞及细胞凋亡，升高bax及降低bcl-2蛋白表达，可能为其诱发肿瘤细胞凋亡的机制之一。 <WP=6>