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胰腺癌恶性程度极高,由于早期缺乏特异症状,进展迅速,缺乏有效的治疗手段。同其它恶性肿瘤一样,胰腺癌是一种基因疾病,其发生发展的分子机制极其复杂,原癌基因、抑癌基因等众多肿瘤相关基因参与其中并且相互作用。KRAS基因是胰腺癌中最重要的原癌基因,是胰腺癌重要的治疗靶点之一。然而,临床研究显示以KRAS基因作为分子靶点的治疗效果并不理想。细胞内的信号通路互相交联构成复杂的通路网络,针对KRAS基因采用的治疗措施可能会导致与它相关联的基因发生改变,从而对治疗产生耐受。为了探寻胰腺癌细胞内哪些基因会对KRAS基因的治疗产生响应,以及探求这些响应的基因是否可以成为胰腺癌治疗的潜在靶点,本论文从以下几个方面进行了研究：1.利用慢病毒载体介导的RNA干扰技术,在人胰腺癌PANC-1细胞基础上构建了三株KRAS基因低表达的稳转细胞系：P-M、P-W和P-H。P-M、P-W和P-H三株细胞的KRAS基因在mRNA水平上的表达分别为亲本PANC-1细胞的54.4%、54%和59%,在蛋白水平上KRAS基因的表达也相应降低。2.以P-M、P-W为实验模型,通过人全基因组表达谱芯片技术研究了PANC-1细胞的KRAS基因被长期抑制后基因表达谱的变化。与亲本PANC-1细胞相比,P-M和P-W细胞中共有225个基因表达发生变化,其中43个基因表达上调,182个基因表达下调。通过实时定量PCR的方法对进芯片的结果进行验证,验证的14个基因为：RPL21、 RPL26、RPL10A、RPL24、RPL39、RPL29、HAPLN3、RPL31、PTPLAD2、ITPRIPL2、 NOL7、FBXO27、TMEM106A、PRAGMIN,实时定量PCR的结果与芯片结果较为符合。3.从上调的43个基因中选择了5个核糖体蛋白基因(RPL26、RPL29、RPL31、RPL21、 RPL39)进行深入研究。分别针对这5个基因设计合成了一系列具有干扰效应的siRNA。在胰腺癌PANC-1细胞中转染针对各个基因的siRNA(40nmol/L)分别关闭RPL26、RPL29、 RPL31、RPL21、RPL39基因的表达：(1)可以显著抑制胰腺癌PANC-1细胞的体外增殖和克隆形成；(2)使PANC-1细胞阻遏于G0/G1期,转染各个siRNA(40/nmol/L,72h)分别关闭RPL26、RPL29、RPL31RPL21、RPL39基因的表达后,G0/G1期由空白对照PANC-1细胞的47.31%分别增加到74.35%、70.8%、71.85%、76.72%、76.18%。4.在胰腺癌PANC-1细胞中转染各个siRNA(40nmol/L,72h)分别关闭RPL26、RPL29、RPL21、RPL39基因的表达可以诱导人胰腺癌PANC-1细胞发生凋亡,凋亡早期的细胞比例由空白对照PANC-1细胞的3.45%分别增加到了11.15%、8.65%、14.39%、10.2%；转染siRNA(40nmol/L,48h)分别沉默RPL26、RPL29基因的表达可以显著降低人胰腺癌PANC-1细胞内的ROS水平；转染siRNA沉默RPL31基因的表达以显著降低胰腺癌PANC-1细胞的迁移能力,降低PANC-1细胞培养上清中VEGF的表达(每106个细胞、24h的VEGF表达量由空白对照PANC-1细胞的2804.62pg减少到1563.45pg)。5.以人胰腺癌BxPC-3细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,瘤内注射siRNA分别抑制RPL31、RPL21、RPL39基因的表达可以显著抑制移植瘤的生长,降低移植瘤细胞的血管生成能力,诱导移植瘤中的细胞发生凋亡；免疫组织化学和TUNEL实验显示,分别抑制RPL31、RPL21、RPL39基因的表达：(1)移植瘤组织中Ki-67蛋白阳性表达比例由溶剂对照组的55.78%减少为11.08%、7.36%、9.28%,(2)移植瘤组织中CD31蛋白阳性表达比例由由溶剂对照组的56.35%减少为9.67%、5.19%、17.73%,(3)细胞凋亡指数由溶剂对照组的2.92%增加到39.58%、35.61%、51.37%。