目的：利用混合多克隆细胞亚群裸鼠体内实验和基因组PCR的方法进行筛选和验证具有肺转移能力的细胞亚群、相关候选基因以及遗传通路,为进一步研究恶性肿瘤转移的分子机理打下基础,为胰腺癌的临床诊断、治疗以及预防提供新的策略和靶点。方法：分别培养实验室前期得到的45个胰腺癌肺转移细胞克隆,待细胞生长至对数生长期时,取1×105个细胞/克隆,将45个细胞克隆混合为多克隆细胞亚群。混合细胞扩增培养后,在第一轮的动物筛选试验中,通过尾静脉的注射方式接种混合的多克隆细胞亚群到裸鼠体内,1×106个细胞/只,裸鼠分为通过饮水给予强力霉素(Doxycycline, Dox)实验组和普通饮水对照组,每组8只。待裸鼠出现濒死体征时,取其肺组织(含转移灶)原代培养肺转移细胞亚群,提取其基因组DNA进行PCR分析,比较两组裸鼠特异基因检出率在第二轮的动物筛选试验中,分别通过尾静脉和腹腔注射2种方式接种裸鼠,1×106个细胞/只,每种接种方式又分为给予强力霉素实验组和普通饮水对照组,每组8只,余操作(原代培养、基因组PCR)同第一轮动物筛选实验。结果：本实验通过两轮动物体内筛选具有高转移特性的胰腺癌细胞株,经原代培养成功得到46个具有肺转移能力的胰腺癌细胞亚群。第一轮经尾静脉接种瘤细胞的裸鼠体内筛选和基因组PCR结果显示：在没有给予强力霉素的8只裸鼠中有5只检测到SQSTM1基因,检出率为62.5%(5/8)；而在给予强力霉素的8只裸鼠中只有3只检测到SQSTM1基因,检出率为37.5%(3/8)。给予强力霉素组裸鼠平均存活时间为92天；普通饮水对照组裸鼠平均存活时间为75天。第二轮经尾静脉接种瘤细胞的裸鼠体内筛选和基因组PCR结果显示：在没有给予强力霉素的8只裸鼠中有6只检测到SQSTM1基因,检出率为75%(6/8)；而在给予强力霉素的8只裸鼠中只有3只检测到SQSTM1基因,检出率为37.5%(3/8)。给予强力霉素组裸鼠平均存活时间为86天,肺脏组织肉眼未见明显转移灶；普通饮水对照组裸鼠存活时间为74天,肺脏组织肉眼可见明显转移灶。第二轮经腹腔接种瘤细胞的裸鼠体内筛选和基因组PCR结果显示：62.5%(5/8)没有给予强力霉素的裸鼠中肺转移检测到SQSTM1基因,而在给予强力霉素的裸鼠中只有33.34%(2/6)的肺转移细胞亚群能够检测到SQSTM1基因。给予强力霉素组裸鼠平均存活时间为87天;普通饮水对照组裸鼠存活时间为76天。两轮裸鼠体内筛选和基因组PCR分析其他候选基因,包括Sema4b,Ube2k和Gna13,均未检测到表达。表明强力霉素介导的SQSTM1基因在胰腺癌肺转移过程中其关键作用。Western-Blot、Q-PCR显示强力霉素能够调控SQSTM1基因的表达和关闭。结论：多克隆混合同步筛选可验证得到胰腺癌肺转移细胞亚群和与其关联的基因。SQSTM1基因在胰腺癌肺转移过程中起关键作用；在“全基因组随机基因调控技术平台”的基础上,通过给予或不给予强力霉素能够实现SQSTM1基因表达的人为控制。