肿瘤抗原肽致敏的脐血树突状细胞治疗人鼻咽癌的实验研究

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目的:用弱酸洗脱提取CNE细胞膜表面的肿瘤抗原肽致敏脐血来源的DCs,观察对CTL的体外诱导作用并评价CTL介导的特异性抗CNE的免疫反应。 方法:从健康脐血中采集单个核细胞(CBMNC),分离黏附细胞并于rhGM-CSF1000u/m、rhIL-4 500u/ml条件下培养;检测DC表型。以弱酸(pH 3.3)处理CNE细胞5分钟,洗脱其表面的HLA-Ⅰ类抗原肽,流式细胞仪检测洗脱率;OASIS-HLB小柱提取纯化洗脱的抗原肽,致敏DCs;致敏DCs与异体外周血T淋巴细胞混合培养产生CTL,3H-TdR掺入法测定细胞的刺激指数;分别以DCs、未经DCs激活的混合T淋巴细胞及DCs诱导的CTL作效应细胞对CNE细胞进行体外杀伤实验。MTT法检测杀伤率。 结果:CBMNC贴壁获得的黏附细胞经细胞因子序贯培养可高表达DC表面抗原CD86、CD1α、CD40、HLA-DR。弱酸可以洗脱CNE细胞膜表面绝大部分与MHC-Ⅰ类分子结合的肿瘤抗原肽,经此抗原肽致敏的DCs,在体外可以激发特异性识别CNE细胞抗原肽的CD8 CTL细胞株的增殖,产生特异性抗CNE的免疫反应。未致敏DCs组和T细胞组无此反应。弱酸洗脱后的CNE细胞继续培养48小时,其表面的HLA-Ⅰ类肿瘤抗原肽重新表达。 结论:CBMNC贴壁获得黏附细胞后经细胞因子序贯培养可获得DCs。弱酸洗脱提取的CNE肿瘤细胞膜表面的肿瘤抗原肽致敏的DCs在体外能够诱导高效而特异的抗鼻咽癌免疫。弱酸洗脱后的CNE肿瘤细胞继续培养可用于再次提取抗原肽。
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