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本文从以下几个方面进行论述：
第一部分:磷酸化Fox04(phosphorylated forkhead box subtype O4，P-FoxO4)参与H9c2细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)损伤
目的：探讨p-FoxO4是否参与H9c2细胞H/R损伤。
方法：H9c2细胞正常培养24h后，均匀接种于6孔板中，密度为4.5*10^5个/ml，按照随机数字表法将其随机分为4组:对照组(Control组)，H9c2细胞缺氧处理1h复氧1h(H1R1组)，缺氧处理1h复氧3h(H1R3组)，缺氧处理1h复氧6h(H1R6组)。四组采用CCK-8检测细胞相对存活率，实时荧光定量PCR(Real-time quantitativePCR，qPCR)法检测Fox04、Bim、Bcl-2和Bax的mRNA含量，确定最佳H/R时间点。对对照组和最佳H/R时间点组进行Hoechst染色检测细胞凋亡程度，JC-1法检测线粒体膜电位水平，Western Blot法检测FoxO4、p-FoxO4、Bim、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。
结果：与Control组相比，H/R处理后的H9c2细胞相对存活率明显降低，其中以H1R1组最为显著(P＜0.01)。与Control组相比，H1R1组细胞凋亡率显著增加(P＜0.01);线粒体膜电位降低，H1R1组Fox04、Bim和Bax的mRNA明显升高(P＜0.01)，Bcl-2的mRNA明显下降(P＜0.01);FoxO4、p-FoxO4和Bim及Bax蛋白水平明显Jt+高(P＜0.05:P＜0.01:P＜0.01;P＜0.05)，Bcl.2的蛋白水平明显降低(P＜0.01)。
结论：p-FoxO4促进细胞凋亡参与H9c2细胞的H/R损伤。
第二部分:p-FoxO4通过调控Bim介导细胞凋亡参与H9c2细胞H/R损伤
目的：通过沉默FoxO4基因以及过表达Bim基因进一步探讨p-FoxO4-Bim信号介导细胞凋亡参与H9c2细胞H/R损伤的分子机制。
方法：H9c2细胞正常培养24h后，均匀接种于6孔板中，按照随机数字表法将其随机分为3组:缺氧/复氧组(H1R1组)、FoxO4沉默+缺氧/复氧组(FoxO4shRNA+H1R1组)、FoxO4沉默和Bim过表达+缺氧/复氧组(FoxO4siRNA+BimoverexpressionRNA+H1R1组，简称shFoxO4+OB+H1R1组)。各组采用CCK-8检测细胞相对存活率;Hoechst染色检测细胞凋亡程度;JC.1法检测线粒体膜电位水平;qPCR法检测FoxO4、Bim、Bcl-2和Bax的mRNA含量;Western Blot法检测FoxO4、p-FoxO4、Bim、Bcl-2、Bax的蛋白表达水平。
结果：与H1R1组相比，FoxO4shRNA+H1R1组的细胞相对存活率显著增加(P＜0.01);捌亡率显著降低(P＜0.01);线粒体膜电位显著改善(P＜0.05);FoxO4、Bim和Bax的mRNA显著降低，Bcl-2的mRNA显著增加(P＜0.01);FoxO4、p-FoxO4和Bim及Bax蛋白水平显著降低(P＜0.01)，Bcl-2蛋白水平显著增高(P＜0.05)。与FoxO4shRNA+H1R1组相比，shFoxO4+OB+H1R1组的细胞相对存活率显著降低(P＜0.01)，细胞凋亡率显著增加(P＜0.01)，线粒体膜电位显著下降(P＜0.05)，Bim和Bax的mRNA显著增高(P＜0.01)，Bcl-2的mRNA显著降低(P＜0.01)。Bim和Bax的蛋白水平显著增高(P＜0.01)，Bcl-2的蛋白水平显著降低(P＜0.01)。
结论：p-FoxO4调控Bim介导细胞凋亡参与H9c2细胞H/R损伤。
第一部分:磷酸化Fox04(phosphorylated forkhead box subtype O4，P-FoxO4)参与H9c2细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)损伤
目的：探讨p-FoxO4是否参与H9c2细胞H/R损伤。
方法：H9c2细胞正常培养24h后，均匀接种于6孔板中，密度为4.5*10^5个/ml，按照随机数字表法将其随机分为4组:对照组(Control组)，H9c2细胞缺氧处理1h复氧1h(H1R1组)，缺氧处理1h复氧3h(H1R3组)，缺氧处理1h复氧6h(H1R6组)。四组采用CCK-8检测细胞相对存活率，实时荧光定量PCR(Real-time quantitativePCR，qPCR)法检测Fox04、Bim、Bcl-2和Bax的mRNA含量，确定最佳H/R时间点。对对照组和最佳H/R时间点组进行Hoechst染色检测细胞凋亡程度，JC-1法检测线粒体膜电位水平，Western Blot法检测FoxO4、p-FoxO4、Bim、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。
结果：与Control组相比，H/R处理后的H9c2细胞相对存活率明显降低，其中以H1R1组最为显著(P＜0.01)。与Control组相比，H1R1组细胞凋亡率显著增加(P＜0.01);线粒体膜电位降低，H1R1组Fox04、Bim和Bax的mRNA明显升高(P＜0.01)，Bcl-2的mRNA明显下降(P＜0.01);FoxO4、p-FoxO4和Bim及Bax蛋白水平明显Jt+高(P＜0.05:P＜0.01:P＜0.01;P＜0.05)，Bcl.2的蛋白水平明显降低(P＜0.01)。
结论：p-FoxO4促进细胞凋亡参与H9c2细胞的H/R损伤。
第二部分:p-FoxO4通过调控Bim介导细胞凋亡参与H9c2细胞H/R损伤
目的：通过沉默FoxO4基因以及过表达Bim基因进一步探讨p-FoxO4-Bim信号介导细胞凋亡参与H9c2细胞H/R损伤的分子机制。
方法：H9c2细胞正常培养24h后，均匀接种于6孔板中，按照随机数字表法将其随机分为3组:缺氧/复氧组(H1R1组)、FoxO4沉默+缺氧/复氧组(FoxO4shRNA+H1R1组)、FoxO4沉默和Bim过表达+缺氧/复氧组(FoxO4siRNA+BimoverexpressionRNA+H1R1组，简称shFoxO4+OB+H1R1组)。各组采用CCK-8检测细胞相对存活率;Hoechst染色检测细胞凋亡程度;JC.1法检测线粒体膜电位水平;qPCR法检测FoxO4、Bim、Bcl-2和Bax的mRNA含量;Western Blot法检测FoxO4、p-FoxO4、Bim、Bcl-2、Bax的蛋白表达水平。
结果：与H1R1组相比，FoxO4shRNA+H1R1组的细胞相对存活率显著增加(P＜0.01);捌亡率显著降低(P＜0.01);线粒体膜电位显著改善(P＜0.05);FoxO4、Bim和Bax的mRNA显著降低，Bcl-2的mRNA显著增加(P＜0.01);FoxO4、p-FoxO4和Bim及Bax蛋白水平显著降低(P＜0.01)，Bcl-2蛋白水平显著增高(P＜0.05)。与FoxO4shRNA+H1R1组相比，shFoxO4+OB+H1R1组的细胞相对存活率显著降低(P＜0.01)，细胞凋亡率显著增加(P＜0.01)，线粒体膜电位显著下降(P＜0.05)，Bim和Bax的mRNA显著增高(P＜0.01)，Bcl-2的mRNA显著降低(P＜0.01)。Bim和Bax的蛋白水平显著增高(P＜0.01)，Bcl-2的蛋白水平显著降低(P＜0.01)。
结论：p-FoxO4调控Bim介导细胞凋亡参与H9c2细胞H/R损伤。