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实验目的:评人脐带间充质干细（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs）为软骨组织工程种子细的可行。要括四部分内：(一)鉴定hUCMSCs的生物学特，体外构建hUCMSCs/软骨细外基质支复合体，并入裸大背部皮下异位构建组织工程软骨；(二) hUCMSCs复合在纤维蛋白凝（fibringel, FG）中修复裸大关节软骨缺损的步研究；(三) hUCMSCs/软骨细外基质支复合体异种移修复兔膝关节软骨缺损的实验研究；(四)制备可双相释放两种生长因子的软骨组织工程取向支。实验法:（1）选取第4代hUCMSCs进行体外软骨、骨、脂诱，流细检细表面标志，与软骨细外基质支复合体外构建组织工程软骨，体外软骨诱2周后入裸大背部皮下异位软骨，4周后取材进行大体观察及组织学分。（2）hUCMSCs复合在纤维蛋白凝中，体外软骨诱2周后，行Dead/Live染色检细活，入裸大股骨滑车远端2.0mm，深1.0mm的软骨缺损，4周后取材行大体观察及组织学分。（3）在新兰大白兔股骨滑车远端4.0mm，深1.0mm的全关节软骨缺损，分别入单纯支、未诱hUCMSCs/软骨细外基质支复合体、诱的hUCMSCs/软骨细外基质支复合体以及缺损旷置组。分别在入后3、6、12、16个月取材，对修复组织进行大体观察、组织学分及生物化学检，并按照ICRS（International Cartilage Repair Society）大体评分及MODS（Modified O’Driscoll Score）组织学评分标准对修复组织进行定量评。（4）利用W/O/W的双乳化剂发技制备负载胰岛素样生长因子（IGF-1）的PLGA微球，与软骨细外基质材料混匀，通过热诱的相分离技（thermal-induced phaseseparation，TIPS）制备组织工程软骨取向支。利用等离子体处理技（plasmatreatment）将TGF-β1锚定在支表面上。实验结果:（1）hUCMSCs为纤维样细态，贴壁生长；体外骨诱后茜素红染色阳，软骨诱后番红花O染色及Ⅱ染色阳，脂诱后油红O染色阳；流细检表明hUCMSCs阳表CD105、CD90、CD73、CD44、HLA-ABC，阴表CD34、CD45、HLA-DPDQDR；hUCMSCs复合软骨细外基质支，无论诱组是未诱组都能在裸大背部皮下类软骨组织，未诱组苯胺蓝染色及番红O染色弱阳，而诱组强阳。（2）hUCMSCs复合在纤维蛋白凝中，无论诱组是未诱组都能在裸大关节软骨缺损处生软骨组织。（3）hUCMSCs复合软骨细外基质支修复兔膝关节软骨缺损，在入后3、6、12、16月4个时间点，未诱组的修复组织ICRS评分及MODS评分都显高于诱组；在未诱组及诱组，后6个月ICRS评分及MODS评分最高，12个月及16个月评分逐渐降低；后6个月时未诱组GAG含量显高于诱组。（4）制备的负载胰岛素样生长因子（IGF-1）的PLGA微球，激光共聚显微显微球内部中空多囊腔结构；免疫荧光检查显两种生长因子都功负载在支上；体外释研究显2种生长因子都能释30天以上。结论:（1）hUCMSCs于间充质干细，具备异位软骨能力，体外诱有利于体内软骨基质。（2）hUCMSCs复合在纤维蛋白凝中能在在裸大软骨缺损区生软骨组织。（3）hUCMSCs复合软骨细外基质支能够修复兔关节软骨缺损；未诱的hUCMSCs修复效果优于体外软骨诱的hUCMSCs；体内产生的修复组织16个月后现不同程度的退变。（4）用W/O/W的双乳化剂发技（doubleemulsion solvent evaporation）功制备载胰岛素样生长因子的微球；利用微球载及等离子体处理锚定技功制备能双相释放两种生长因子的软骨细外基质取向支。