【摘 要】
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三唑酮(Triadimefon)是一种内吸性广谱类三唑类杀菌剂,对小麦、玉米、果蔬等作物上的锈病、白粉病有较好的防治效果,在农业生产中被广泛使用。三唑酮稳定性强,具有良好的移动性和吸附性,容易在环境中持久累积,并且生产中存在过量不规范使用的现象,从而对作物品质,环境安全和人类健康造成威胁。因此,如何降解环境中的三唑酮近年来备受关注。微生物降解具有高效和安全等优点,是消除自然环境中三唑酮等农药残留最
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三唑酮(Triadimefon)是一种内吸性广谱类三唑类杀菌剂,对小麦、玉米、果蔬等作物上的锈病、白粉病有较好的防治效果,在农业生产中被广泛使用。三唑酮稳定性强,具有良好的移动性和吸附性,容易在环境中持久累积,并且生产中存在过量不规范使用的现象,从而对作物品质,环境安全和人类健康造成威胁。因此,如何降解环境中的三唑酮近年来备受关注。微生物降解具有高效和安全等优点,是消除自然环境中三唑酮等农药残留最具应用前景的技术之一。本研究利用微生物富集驯化技术从长期受三唑酮污染的土壤中分离到一株以三唑酮为唯一氮源生长的菌株TY18。根据形态学特征、生理生化特性,结合16S r RNA和gyr B基因序列同源性分析,将菌株TY18鉴定为霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)。对菌株TY18的降解能力进行研究,发现在28℃,p H为7时,培养7 d,菌株在含100mg/L三唑酮的培养基中生长量为0.46,三唑酮的降解率为49.56%,说明该菌株对三唑酮有较好的降解作用。以三唑酮为唯一氮源作为处理组,以尿素为唯一氮源作为对照组,提取菌株TY18的总RNA,通过Illumina HiseqTM2000平台进行转录组测序。通过对测序结果比对分析,共得到5367个以m RNA为转录本的基因。分析得到408个差异表达基因(DEGs,P-adjust<0.05,|log2FC|≥1),其中上调的有190个,下调的有218个。对差异基因进行GO和KEGG富集分析,发现差异基因富集在氮利用、碱基分解、尿嘧啶分解、嘧啶碱基分解代谢和组氨酸代谢等通路中。结合差异表达分析和功能富集分析,筛选得到41个三唑酮降解候选基因。同时,选取18个差异表达的基因进行荧光定量PCR验证,结果表明基因表达情况与转录组测序的表达水平较为一致。通过转录组分析发现,rutB基因在以三唑酮为唯一氮源时显著高表达,该基因作用于碳氮键,具有水解酶活性。将基因rutB插入到p ET32a(+)载体中,构建p ET32-rutB表达载体,在IPTG的诱导下,该基因在E.coli BL21(DE3)中成功表达。将重组菌株进行体外降解试验,结果表明:其对三唑酮的降解率为35.56%,对其它三唑类杀菌剂降解率为53.67-62.82%。由此证明,rutB基因对菌株TY18降解三唑酮具有一定的正调控作用。本研究为三唑酮农药残留的微生物修复提供了降解菌及相关基因的新资源,也为构建三唑酮高效降解工程菌提供科学依据。
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