在目前的水产养殖过程中,病毒、病菌会对鱼类造成威胁、环境因子的急剧变化等也会对其造成不良应激。尤其是夏季,是鱼病的高发期,应激现象也尤为严重,疾病大规模的爆发,造成了死亡率上升和生长缓慢等现象,最终造成了巨大的经济损失。过去主要是通过使用抗生素来对抗疾病,但是抗生素的负面影响也有不少报道,因此,如何通过绿色环保的途径提高鱼体免疫力成为当前研究的热点。果寡糖是一种不能被机体完全消化吸收利用而通过调节肠道微生物促进机体健康的一种新型饲料添加剂,作为饲料添加剂有着广阔的应用前景。团头鲂(Megalobrama amblycephala)和三角鲂(Megalobrama terminalis)都是鲂属鱼类,属于鲤科,具有生长速度快,易繁殖,抗病力强,肉质鲜美等特点成为淡水养殖的珍品。近年来,由嗜水气单胞菌等病菌的感染、应激引起的暴发性出血病在团头鲂养殖中也时有发生。鉴于此,本研究通过研究果寡糖对鲂属鱼类健康机理调控机制的影响,开发新型饲料添加剂,增强鲂属鱼类的免疫力,提高其抗病力和抗应激能力,为解决水产养殖中容易出现的高发病率和应激提供依据。本研究试验内容主要由6部分组成:1饲料中不同添加水平的果寡糖在不同投喂模式下对团头鲂生长性能、免疫指标、抗氧化和抗病力的影响本试验的目的主要是探讨饲料中的果寡糖在不同添加水平和不同投喂模式下对团头纺生长性能、免疫指标、抗氧化和抗病力的影响,3个果寡糖水平(0、0.4%、0.8%)和2种投喂模式(连续投喂、间隔5天投喂)采用3×2因素设计,经过8周的养殖试验后,用嗜水气单胞菌在1×105cfu/ml浓度下对采样剩余的鱼进行攻毒试验,并统计其在96h内的死亡率。试验结果表明,连续投喂0.4%组和间隔投喂0.8%果寡糖组的生长性能较好,血清中溶菌酶、ACP、MPO的活性以及补体C3、总蛋白和免疫球蛋白的含量都是在间隔投喂0.8%果寡糖组出现最大值,显著好于(P<0.05)对照组或连续投喂0.8%果寡糖组,但是和连续投喂0.4%果寡糖组并无显著差异(P＞0.05),抗菌肽LEAP-1和LEAP-2都出现相同的趋势,死亡率在间隔投喂0.8%果寡糖组出现最小值,显著低于对照组,此试验结果表明,果寡糖在适宜的添加浓度和投喂模式下能够提高团头鲂生长性能、免疫力、抗氧化能力和抗病力,连续投喂0.4%果寡糖组和间隔投喂0.8%果寡糖组产的效果较好。2高温应激下果寡糖对团头鲂免疫、抗氧化和热休克蛋白基因表达的影响本试验的目的是研究果寡糖在高温应激下对团头鲂免疫、抗氧化和热休克蛋白(HSP70和HSP90)基因表达的影响,360尾初重为13.8g的团头鲂随机被分为3组,每组有4个重复,每缸30尾鱼,分别投喂果寡糖浓度为0、0.4%、0.8%的三组饲料,经过8周的养殖试验后,每缸挑选20尾鱼,用34℃的高温对其进行急性热应激试验,并分别在应激前(Oh)和应激后的3h、6h、12h、24h、48h采样。结果表明血液皮质醇和血糖在应激后的3h和6h处0.4%果寡糖组明显低于对照组(P<0.05),乳酸含量在这一组的3h处也显著小于对照组(P<0.05),血液溶菌酶、酸性磷酸酶和补体ACH50的活性以及总蛋白、免疫球蛋白的含量在应激后都呈现先升高或降低的趋势,并在6h处出现最大值,另外添加0.4%果寡糖组的免疫指标的活性在3h或6h处大部分都显著高于对照组(P<0.05);肝脏SOD和CAT活性在应激前和应激后都是0.4%果寡糖组显著高于对照组(P<0.05),而MDA含量呈相反的趋势;添加果寡糖增强HSP70和HSP90基因的表达量,并在3h、6h或12h显著高于对照组(P<0.05)。本试验得出饲料中添加适宜浓度的果寡糖能够提高团头鲂的免疫指标活性、抗氧化能力和热休克蛋白的表达,从而提高了团头鲂的抗高温应激的能力。3氨氮应激下果寡糖对团头鲂免疫、抗氧化和热休克蛋白基因表达的影响本试验的目的是研究在氨氮应激条件下果寡糖对团头鲂免疫指标、抗氧化和热休克蛋白(HSP70和HSP90)基因表达的影响,360尾初重为13.8g的团头鲂随机分为3组,每组4个重复,每缸30尾鱼,对照组投喂基础日粮,试验组分别投喂果寡糖添加浓度为0.4%和0.8%的试验日粮,养殖试验结束后,用10mg/L的NH4Cl对采样剩余的24尾鱼进行氨氮应激试验。试验结果表明,应激后的3h或6h分别发现,血清皮质醇和血糖在投喂0.4%果寡糖组显著低于对照组(P<0.05),血清溶菌酶、补体ACH50的活性以及NO的含量都呈现先升高后降低的趋势,并且分别在6h,6h,和3h的0.4%果寡糖组显著高于对照组(P<0.05),在应激前后的0.4%组肝脏的超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性都显著高于对照组(P<0.05),但是丙二醛含量的变化呈相反的趋势。应激后,试验验组的HSP70和HSP90的相对表达量分别在6h和12h处显著高于对照组(P<0.05),应激后12h后发现试验组的累计死亡率也显著低于对照组(P<0.05),本试验结果表明饲料中添加0.4%的果寡糖能够提高团头鲂的免疫力指标活性、抗氧化能力和热休克基因的表达,从而提高了团头鲂抗氨氮应激的能力。4果寡糖和芽孢杆菌交互对三角鲂生长性能、体组成、肠道消化酶和肠道微绒毛发育的影响本研究的目的是为了研究果寡糖和地衣芽孢杆菌对三角鲂生长性能、体组成、肠道消化酶和肠道微绒毛的发育的影响,采用3×3交互的方法,试验鱼随机分成9组,其中果寡糖分别为0、0.3%、0.6%3个水平,芽孢杆菌的添加水平分别为0、1×107CFU/g、5×107CFU/g三个水平。经过8周的养殖试验后,试验结果得出末重和特定生长率都随着果寡糖的添加量的增加而呈现升高趋势,而随着芽孢杆菌的增加而呈先升高后降低的趋势,另外,果寡糖和芽孢杆菌的交互作用对三角鲂的末重、特定生长率和成活率都有较显著的影响(P<0.05),并在果寡糖添加量为0.3%、芽孢杆菌1×107CFU/g复配组生长性能出现最大值,肝体比、胴体脂肪含量、脂肪酶活性和肠道微绒毛长度都随着芽孢杆菌添加量从0到1×107的增加而增加,但这些指标受果寡糖添加水平的影响并不显著(P>0.05);蛋白酶和Na+,K+-ATP酶的活性受果寡糖和芽孢杆菌交互作用的显著影响(P<0.05),并果寡糖添加量为0.3%、芽孢杆菌1×107CFU/g复配组出现最高值,以上试验结果表明饲料中添加适量的果寡糖和芽孢杆菌可以提高三角鲂的生长性能、肠道消化酶和微绒毛长度,并且果寡糖和芽孢杆菌之间存在显著的交互作用,饲料中最适的添加水平为0.3%果寡糖和1×107CFU/g的芽孢杆菌配伍。5果寡糖和芽孢杆菌交互对三角鲂免疫指标活性、抗氧化和抗病力的影响为了研究果寡糖和地衣芽孢杆菌交互对三角鲂免疫、抗氧化和抗病力的研究,三个水平的果寡糖(0、0.3%和0.6%)以及三个芽孢杆菌水平(0,1×107,5×107CFUg-1)通过3×3因素交互,共制成9组饲料,投喂三角鲂8周,养殖试验结束后用嗜水气单胞菌进行攻毒试验,并统计其一周内的累计死亡率,结果表明,随着芽孢杆菌添加水平从0到1×107CFU/g的增加而增加,血液白细胞数、补体ACH50、总蛋白和球蛋白都呈升高的趋势,但是果寡糖添加水平对这些指标并无明显的增加(P＞0.05),碱性磷酸酶和酚氧化酶都受到果寡糖添加水平的显著影响,分别在添加0.6%和0.3%组出现最大值,免疫球蛋白和肝脏超氧化物歧化酶都是即受到果寡糖添加水平的影响(P<0.05),又受到芽孢杆菌添加水平的显著影响(P<0.05),肝脏中的CAT、GPX和血液中的SOD的活性在1×107 CFU/g组显著高于其它组(P<0.05),但是丙二醛的含量呈相反的趋势,嗜水气单胞菌攻毒后累计死亡率显著受到果寡糖和芽孢杆菌交互作用的影响(P<0.05),并且在0.3%果寡糖和1×107CFU/g芽孢杆菌配伍组死亡率最小,本研究结果表明果寡糖和地衣芽孢杆菌能显著提高三角鲂的免疫指标活性、抗氧化和抗病力。并建议三角鲂饲料中添加0.3%果寡糖和1×107CFU/g的地衣芽孢杆菌复配使用。6团头鲂IL-6基因克隆分析和氨氮应激及攻毒对其表达量的影响IL-6基因是典型的促炎因子,在免疫反应和炎症反应起到重要作用,并能影响巨噬细胞的功能,本研究主要是对IL-6基因的cDNA的全长序列进行了克隆,并对在氨氮应激以及攻毒之后,它在不同组织表达量变化的差异进行了分析,结果显示IL-6基因一共包含了 1045个碱基,开放阅读框有696个碱基,翻译了 232个氨基酸,其中信号肽是1-24个氨基酸,通过对不同组织IL-6基因的相对表达量分析,IL-6基因在肠道、肝脏和鳃组织的表达比较高,在眼和腹脂的表达量较低,在氨氮应激之后,脾脏和肠道IL-6基因的相对表达量出现先上升后下降的趋势,并分别在6h和12h到达了最大值,在48h又恢复到了应激前的水平,但是肝脏IL-6基因的表达在前3h先出现下降之后又上升并在12h达到最大;攻毒之后脾脏、肠道和肝脏都呈先上升后下降的趋势,并分别在攻毒后的6h、3h和6h达到最大值,本研究结果对以后研究抗应激和抗病菌机制提供一定的理论依据。