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第一部分钳夹型急性大鼠脊髓损伤模型的建立与评估[目的]钳夹型模型已经广泛应用于实验性大鼠脊髓损伤研究。夹子产生的力量同时作用于脊髓背腹侧,类似于人类脊髓损伤机制,是接近于人类最常见的脊髓损伤类型。本实验在急性大鼠脊髓损伤后28天内的多个时间点,在大鼠活体内采用多元评估方式,其中包括BBB行为学、MRI影像学、SEPs电生理、HE染色和病理组织形态学评估。建立一种科学的、可重复的、易操作的、稳定的大鼠的急性脊髓钝性损伤模型。[方法]1.综合对比各种测试的行为学评分方法,BBB评分与损伤后的形态学有良好的相关性。本实验随机将16只SD大鼠分成脊髓损伤组与对照组。脊髓损伤组建立脊髓T10节段钳夹脊髓损伤模型；对照组动物打开椎管,不伤脊髓；建模后1d、3d、5d、7d、14d、21d、28d分别进行BBB行为学评分,评估神经功能恢复情况；行体感诱发电位检测,评估神经传导通路的完整性。2.躯体感觉诱发电位(SEP)主要用于检测脊髓背角感觉神经元与脊髓后索至大脑皮层通路的完整与一致性。能从不同角度反映SCI损伤的轻重程度,而MRI能准确描述SCI后连续的局部组织的形态改变。本实验采用16只SD大鼠建立脊髓钳铗钝性损伤模型,其中假手术组8只,脊髓损伤组8只,术后6h、1d、3d、7d、14d、21d、28d使用MRI及SEPs对受损脊髓情况进行连续性评估。通过MRI检查,观察损伤脊髓的出血、肿胀、膨大,在T2WI矢状位像上测量损伤点及头尾端的脊髓直径大小。3.32只SD大鼠在术后28天内多个时间点,取损伤尾端的脊髓组织检测,观察白质、灰质毁损情况,瘢痕清晰度及出血、坏死空洞的情况；与行为学、脊髓直径的数据相关联。4、运用SPSS Statistics17.0统计学软件进行分析,两组数据及比值均数比较采用配对样本t检验,以α=0.05作为检验标准。[结果]1、BBB评分结果提示,两组数据纵向比较,假手术组明显高于损伤组；每组数据随着术后时间的增长逐渐增高；同一组内不同时间点有明显差别(P<0.05)。同一时间点不同组间比较有明显差别(P<0.05)。2、假手术组SEP的波形正常,术后潜伏期略延长,波幅略降低,随后恢复正常。脊髓损伤组SEP测定：术后短期(7天内)未引出波形,7d以后SEP的潜伏期长,波幅低；随着时间的增长,潜伏期缓慢下降,波幅逐渐增高(表2)。假手术组各时间段的潜伏期、波幅对比均有显著差异(P<0.05)；脊髓损伤组各时间段的潜伏期、波幅对比均有明显差异(P<0.05)3、MRI结果：术后6h胸段脊髓创伤部位呈局限性点状T2WI高信号影；术后1d至3d,胸段脊髓肿胀,损伤处及尾端脊髓呈大片状T2高信号改变；术后7d至14d,胸段脊髓内片状T2WI高信号区范围缩小；术后21d至28d,胸段脊髓内仅有小片T2WI高信号影,脊髓远端直径较正常明显缩小。假手术组在各时间点脊髓MRI均无明显改变。4、HE染色病理结果：损伤后6h-1天脊髓灰白质出血水肿、结构紊乱、灰质板层消失,3-7天神经元结构逐渐破坏,神经细胞肿胀,核固缩；7-14天炎性细胞大量浸润,神经细胞水肿减轻；21-28d可见神经细胞逐渐减轻,炎性细胞开始消退,胶质细胞增生；假手术组组织结构清晰。[结论]本研究通过几种手段对大鼠脊髓钝性损伤后的神经功能缺损与恢复进行评估。BBB评分对神经功能恢复情况进行评估,MRI通过非侵袭行的方式对损伤后病情进行评估,SEPs对神经传导通路进行评估,取材后进行病理组织学描述、神经行为学评估,将获得的数据验证本模型的科学性,证实了钳夹型大鼠脊髓损伤模型的稳定性与可重复性,为后期的研究提供了科学的依据。第二部分、电针对大鼠脊髓损伤后少突胶质细胞的调控[目的]脊髓损伤(SCI)是中枢神经系统(CNS)最严重的损伤,其再生修复机制至今尚未明了。外源性神经干细胞(NSC)移植存在成瘤性、异向分化、组织相容性等问题,而内源性NSC不存在这些弊端。本实验将中国传统医学电针作为干预手段,研究脊髓损伤后电针对内源性干细胞的调控研究,其中电针是否能促使内源性神经干细胞向脊髓少突胶质细胞分化与增殖,是本试验的研究的主要目的。[方法]督脉电针治疗SCI有较好的临床疗效已得到医学界广泛的认可,但其具体作用机制尚不完全清楚,本实验采用电针作为干预手段,来研究脊髓损伤的恢复机制。1、实验大鼠随机分为3组：假手术组、脊髓损伤组、电针组。建立动脉瘤夹脊髓损伤模型,假手术组不做脊髓损伤处理,仅打开椎板。脊髓损伤组行脊髓损伤手术处理,电针组脊髓损伤术后行电针干预。于预定时间点(损伤后7h、1d、3d、7d、14d、21d、28d)灌注后取大鼠脊髓损伤段(假手术组取相应节段)脊髓组织行免疫组化染色。2、通过冰冻切片后,DAB染色后查看损伤后大鼠尾端脊髓前角少突胶质细胞增殖情况。3、运用SPSS17.0统计学软件进行分析,脊髓前角增殖细胞数目各项数据均数比较,以α=0.05作为检验标准。[结果]1、同一时间点不同组之间,少突胶质细胞数目比较,电针组明显高于其他组；之间的对比有显著差异(P<0.05)。2、电针组之间不同时间点对比,随着电针时间的增长,少突胶质细胞数不断增长；不同时间点之间的对比有显著差异(P<0.05)。[结论]1、电针能促使大鼠脊髓损伤后的功能恢复；2、少突胶质细胞数在同一时间点不同组之间,电针组明显高于其他组；3、少突胶质细胞数在随着电针周期的延长,逐渐增高；4、电针可能促使内源性干细胞向少突胶质细胞分化。