兔病毒性出血症(rabbit hemorrhagic disease, RHD)又称兔瘟,是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV)引起的一种感染成年兔的急性、烈性、高发病率和高致死率的传染病,严重危害着世界养兔业的发展。由于RHDV尚无稳定的培养细胞,这影响着RHDV的细胞侵染机理和防控等方面的研究,加之RHDV近年新的变异毒株(RHDV2)的出现和流行,这为RHD的防治带来了新的困难。因此本文将建立的Taq-Man实时荧光定量RT-PCR检测方法对新出现的RHDV的变异株也进行了特异性验证。同时进行了RHDV的家兔和乳鼠感染检测试验,具体如下：根据兔瘟病毒VP60蛋白基因的序列设计了一对引物,克隆出986bp的RHDV VP60基因片段作为实时荧光定量RT-PCR检测的阳性模板。在克隆阳性模板的目的片段区间,利用Beacon Designer 8软件设计1对引物及1条探针,目的片段为173bp,在探针的5’端标记FAM,3’端标记TAMRA,建立Taq-Man实时荧光定量RT-PCR的检测方法,并对反应条件进行了优化,绘制了标准曲线。通过灵敏度试验和特异性试验表明,建立的Taq-Man实时荧光定量RT-PCR具有较高的灵敏度和良好的特异性,适用于RHDV临床样品的快速准确检测。对市场上买来未免疫过RHDV的10只成年家兔进行RHDV感染,10只家兔3天内死亡,对家兔的主要内脏器官制作并观察了病理切片,同时采集的家兔的主要内脏器官各0.2g,血液200μL进行病毒含量检测,结果显示病死家兔具有典型的兔瘟病理组织学变化,且各内脏器官中均含有RHDV,阳性率为100%,各个器官中含毒量大小依次为血浆,血细胞,肝脏,脾脏,心脏,肾脏,肺脏,肌肉。同时分别对乳鼠进行了背部注射RHDV的体内感染检测和乳鼠主要脏器原代细胞培养后接毒的检测试验,结果显示乳鼠在24h内死亡,死亡乳鼠的各个脏器的RHDV含量检测均为阳性,其中在肾脏和肺脏中的病毒含量较高。培养了乳鼠主要脏器的原代细胞,接种RHDV后,RHDV的检测结果显示,除了乳鼠肾脏原代细胞内有微量RHDV的存在,其他脏器的原代细胞中RHDV的含量可疑。以上的研究为RHDV细胞侵染的机制研究奠定了基础和提供了科学参考。