淋巴囊肿病(Lymphocystis disease)是一种流行广泛、危害严重的鱼类病毒病。本实验用抗牙鲆淋巴囊肿病毒的单克隆抗体通过免疫荧光抗体技术(IFAT)和标记链亲和素—生物素(LSAB)免疫组织化学方法对淋巴囊肿病毒在鱼体内的分布进行了检测定位,并对病毒的感染途径进行了探讨。 采用不连续密度梯度离心的方法从牙鲆体表的淋巴囊肿组织中分离提纯病毒作为抗原。运用细胞融合技术,筛选、克隆出4株产生抗牙鲆淋巴囊肿病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞(2A9、1A8、1B2、3G3)。这4种单抗具有与牙鲆淋巴囊肿病毒特异性结合,与组织无交叉反应的特性。 应用单克隆抗体通过免疫荧光抗体技术和免疫组化标记链亲和素—生物素法,对患淋巴囊肿病的牙鲆和黑鲪的10种组织进行了检测,实验结果显示:在体表布满淋巴囊肿的牙鲆的胃、肠、鳃和表皮组织内有病毒阳性信号,其中胃和肠组织中阳性信号位于腔面的粘膜上皮表面,鳃组织中阳性信号位于鳃小片边缘,表皮组织中阳性信号位于皮下肌肉的肌纤维表面;在同一养殖池内体表无明显症状的牙鲆的胃、肠和表皮组织内检测到了病毒阳性信号,并且阳性信号在上述组织中出现的位置与症状严重的牙鲆相同,但鳃组织中并未检测到病毒阳性信号;在体表长有淋巴囊肿的黑鲪的胃、鳃和皮下肌肉组织中检测到了病毒阳性信号,且阳性信号在组织中出现的位置等与牙鲆的情况基本相同;而健康牙鲆和黑鲪组织的检测结果均为阴性。这说明免疫荧光抗体技术和免疫组化标记链亲和素—生物素法可以应用于鱼类淋巴囊肿病特别是发病早期时的检测和诊断,检测结果表明淋巴囊肿病毒可能通过消化道感染,并且在感染初期不感染鳃组织,到了严重发病时才感染到鳃组织。 在用抗牙鲆淋巴囊肿病毒的4株单克隆抗体通过免疫荧光抗体技术对黑鲪淋巴囊肿病进行检测时还发现,其中有3株单抗(2A9、1A8、3G3)与黑鲪的淋巴囊肿细胞呈阳性反应,有1株单抗(1B2)呈阴性反应,这说明感染牙鲆的淋巴囊肿病毒和感染黑鲪的淋巴囊肿病毒在抗原决定簇上存在着差异。