特异性结合肽与卵巢癌靶向效应的研究

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目的验证课题组前期利用噬菌体展示技术所筛选的卵巢癌特异性结合肽的靶向性及定位分布情况,将此肽命名为OSTP(Ovarian Cancer SpecificTargeting Peptide)。通过分析OSTP对卵巢癌A2780细胞的体内外特异性结合作用及对人体卵巢癌靶向效应,探索新的卵巢癌分子靶向药物。方法1.合成OSTP并标记荧光素5-FAM。培养卵巢癌A2780细胞及对照组胃癌SGC7901细胞、骨肉瘤MG63细胞,分别加5-FAM-OSTP、50%DMSO孵育不同时间,荧光显微镜下观察拍照。2.构建卵巢癌A2780细胞荷瘤小鼠模型,用4.9mg/ml的5-FAM-OSTP尾静脉注入裸鼠体内,对照组尾静脉注入4.9mg/ml的5-FAM-NSTP(非特异肽)200ul,溶媒对照组20%DMSO200ul,循环后进行左心室灌注,取肿瘤组织及各脏器组织,行冰冻切片,荧光显微镜下观察拍照。调整5-FAM-OSTP在体内循环时间,观察肿瘤组织荧光强度变化情况。3.收集人卵巢癌标本38例、人卵巢囊腺瘤11例、其他卵巢肿瘤12例、人卵巢标本10例、子宫内膜肌壁10例,进行5-FAM-OSTP免疫荧光染色,浓度为2.0mg/ml并用DAPI复染,观察荧光结合情况,相同组织切片予HE染色常规诊断。检测OSTP对卵巢癌的特异性结合作用。结果1.成功合成和标记5-FAM-OSTP。细胞免疫荧光显示:溶媒对照组均不产生荧光;5-FAM-OSTP孵育后的卵巢癌A2780细胞产生较明亮的黄绿色荧光,胞膜明显。而对照组SGC7901、MG63细胞不产生荧光。2.5-FAM-OSTP裸鼠体内循环实验结果显示:5-FAM-OSTP在卵巢癌荷瘤裸鼠肿瘤组织可见强荧光信号,而5-FAM-NSTP(非特异肽)、20%DMSO在肿瘤组织无明显荧光信号。采用ImageJ软件进行荧光强度分析5-FAM-OSTP在各组织的荧光信号,肿瘤组织平均荧光强度为70.148±3.109;肾组织平均荧光强度9.861±0.502;肝组织平均荧光强度8.575±0.381;肿瘤组织与肝、肾组织的荧光强度差异有显著性(P<0.05);其他对照器官荧光强度极弱。5-FAM-OSTP体内循环随着时间延长,肿瘤组织的荧光强度逐渐减弱。3.5-FAM-OSTP与卵巢癌结合作用较强,在38例卵巢癌中有33例胞膜和胞浆可见荧光信号,胞膜为强荧光信号;10例其他卵巢肿瘤中有2例颗粒细胞瘤见荧光信号,而在卵巢囊腺瘤和卵巢正常组织、子宫内膜肌壁亦无明显荧光。结论卵巢癌特异性结合肽OSTP在体内外均与卵巢癌A2780细胞有靶向结合作用,并且与人体卵巢癌组织细胞有很好的靶向效应,为卵巢癌的早期无创性诊断及靶向药物治疗奠定了基础。
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