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复发性流产(recurrentspontaneousabortion，RSA)是妇产科常见病，其在育龄妇女中的发病率约为1-5%，严重影响了患者的身心健康。RSA病因复杂，50%以上的患者病因未明，多与免疫因素有关。近年，淋巴细胞主动免疫治疗（lymphocytesimmunotherapy，LIT）已广泛应用于原因不明复发性流产（unexplainedrecurrentspontaneousabortion，URSA）的治疗，但对其疗效评价仍有争议。国内外诸多学者对淋巴细胞主动免疫治疗的作用机制及疗效评价进行了探讨，取得了积极的进展，但有关具体的作用机制目前仍不明确，尚未达成疗效评价标准的共识。本研究通过收集复发性流产患者的临床资料，对其病因进行分析，通过检测RSA患者流产后及主动免疫治疗后淋巴细胞免疫表型变化，进一步了解其发病机制及淋巴细胞主动免疫治疗的作用机制和疗效评价，探讨其在RSA诊治中的应用价值。本研究分成三部分：第一部分复发性流产病因分析研究目的分析临床上RSA患者的病因，为临床诊治提供参考依据。材料和方法对195例RSA患者的临床资料进行分析。所有入选患者均经过严格和详细的病因筛查，主要包括感染因素、夫妇双方外周血染色体核型分析、子宫解剖结构、内分泌及免疫因素(主要包括一些自身抗体)的检测。结果195例复发性流产患者，原发性RSA181例(92.82%)，继发性复RSA14例(7.18%)。染色体异常11例(5.64%)；子宫解剖结构异常20例，(10.26%)；生殖道感染11例(5.64%)；致畸四项(TORCH-IGM)阳性3例(1.54%)；内分泌异常37例(19.8%)；自身抗体阳性19例(10.2%)，其中两项或两项以上异常10例，不明原因者104例(53.33%)。结论复发性流产病因复杂。临床上常见的病因主要有：遗传因素、感染因素、生殖道解剖结构异常、内分泌异常及免疫因素等，而50%以上无明确病因。部分患者是多因素致病，且反复流产会产生一些继发的病变，导致病因分析困难，影响临床治疗效果。因此，对RSA患者进行详细规范的病因筛查是治疗成功的前提和关键。第二部分原因不明复发性流产患者外周血淋巴细胞免疫表型研究研究目的分析URSA患者外周血淋巴细胞(T、B、NK、Treg细胞)的免疫表型，探讨其与URSA发病的关系及其在辅助诊断中的应用价值。方法选取原因不明复发性流产(URSA)患者25例作为研究组，正常早孕(normalearlypregnant，NEP)70例和正常非孕妇女(normalnonpregnant，NNP)25例作为对照组，采用流式细胞术(flowcytometrymethod，FCM)检测外周血T淋巴细胞(CD3+、CD4+、CD8+T细胞、CD3+HLA-DR+、CD4+HLA-DR+、CD8+HLA-DR+、CD4+/CD8+比值水平)、B淋巴细胞(CD19+、CD5+CD19+、CD5-CD19+)、NK细胞(CD3-CD56+、CD56dimCD16+、CD56brightCD16-、CD56+CD69+)和Treg细胞(CD4+CD25+CD127dim)免疫表型。结果1.三组间CD3+T细胞比例和CD4+/CD8+比率均无显著差异，URSA组CD8-CD4+细胞占T细胞的比例较NNP组明显增加(P<0.05)，但与NEP组比无明显差异。NEP组CD4-CD8+细胞占T细胞比例较NNP组显著升高(P<0.01)。URSA组CD3+、CD8+T细胞活化率比NEP组明显增加(P<0.01)，与NNP组比无显著差异，而三组间CD4+T细胞活化率并无明显差异。2.NEP组Treg细胞比例较URSA和NNP组均明显增加(P＜0.01)，但URSA和NNP组间并无明显差异。3.URSA组CD5+CD19+B细胞占淋巴细胞的比例较NNP组和NEP组均明显增加，而CD5-CD19+细胞占B细胞比例则下降。4.URSA组CD3-CD56+NK、CD56dimCD16+NK细胞比例较NEP组明显增加(P＜0.05)，与NNP组比较则无显著差异，而CD56brightCD16-NK比例较NNP和NEP组均降低(P＜0.01)，而NEP组和NNP组比较无显著差异(P＞0.05)。CD3+CD56+NKT、CD56+CD69+NK细胞三组间均无明显差异。结论1.URSA患者非孕状态仍存在免疫失衡。外周血T淋巴细胞活化、CD5+CD19+B细胞、CD56dimCD16+NK细胞的增多可能是其致病的免疫基础；CD8+T细胞及Treg细胞有利于妊娠的维持。2.流式细胞术是一项简单又实用的技术，可应用于URSA的辅助诊断，淋巴细胞的免疫表型，如Treg细胞、活化T细胞以及CD56dim、CD56brightNK细胞表型有望作为URSA的辅助诊断的参考指标。第三部分淋巴细胞免疫表型在原因不明复发性流产患者主动免疫治疗中变化分析研究目的通过分析淋巴细胞主动免疫治疗(LIT)前后淋巴细胞免疫表型的变化(T、B、NK、Treg细胞各亚群表达频率)，了解其作用机制，为临床疗效评价提供理论依据。方法选取接受LIT的URSA患者14例，采用FCM检测外周血T、B、NK细胞和Treg细胞免疫表型，具体检测指标同第二部分。结果1、治疗前后URSA患者外周血B细胞和Treg细胞(CD4+CD25+CD127dim)表达频率均无明显差异。2、CD3-CD56+NK细胞占淋巴细胞的比例治疗前(11.06±4.14)较治疗后(9.10±4.07)明显降低(P<0.05)。而CD56++CD16-NK、CD56dimCD16+NK、CD3+CD56+NKT及CD69+NK细胞则无明显变化。3、CD3+T占淋巴细胞的比例、CD4+HLA-DR+/CD4+比例较治疗前明显增加，CD8-CD4+T细胞占T细胞的比例则明显下降(P<0.05)。而CD3+CD8+T细胞及其活化率、CD4+/CD8+比率治疗前后并无明显差异(P＞0.05)。结论LIT可能通过降低CD3-CD56+NK细胞比例，增加对CD4+T细胞的刺激活化而产生作用，而CD3+T细胞的增加可能预示细胞免疫增强。T细胞和NK细胞的免疫表型变化可望作为LIT疗效评价的重要指标之一。