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内源性抗菌肽（Endogenous antibiotic peptides）是动、植物天然免疫的重要介质,在哺乳动物（包括人）中,由于对革兰氏阳性菌、阴性菌、真菌、螺旋体、分枝杆菌及某些包膜病毒等有很强杀伤活性,故将其命名为防御素（defensin）。迄今为止,在人体中已发现的防御素共有三类（α、β、θ）。其中β防御素家族共发现28种。研究表明人β防御素-2（Humanβ-defensin-2,hBD-2）是粘膜和上皮细胞抵抗微生物入侵的重要介质,在持续暴露在病原微生物的器官（皮肤、脏器等）粘膜表面发挥重要的抗菌作用,是第一个发现的可诱导表达的抗菌肽,它不仅具有广谱抗微生物活性,而且在先天性免疫和获得性免疫中发挥重要的作用,起着连接先天性免疫和获得性免疫的桥梁作用。因此hBD-2在治疗肺部感染性疾病、皮肤病中具有广泛的应用前景。临床治疗呼吸道感染性疾病工作中,细菌对传统的抗生素的耐药已成为当今治疗呼吸道感染疾病面临的难题,应当从新的角度研发抗感染药物,作为内源性抗菌肽的代表hBD-2是当今研究的焦点。但hBD-2作为一种新型抗菌物质使用于临床进行开发,目前遇到很大困难,例如:人工合成造价极其昂贵;通过基因工程技术生产也面临许多难题等。因此,本实验通过选用肺炎链球菌、脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）及TNF-α刺激人原代支气管上皮细胞（human bronchial epithelial cells,HBECs）,检测hBD-2表达;凝胶迁移率法（EMSA）及激光共聚焦显微镜技术检测hBD-2表达时NF-κB活性、类型及细胞内钙离子浓度（[Ca2+]in）的变化;以及用不同的钙调节剂（EGTA、BAPTA-AM、肝素及ATP）与TNF-α联合作用于细胞,对hBD-2 mRNA表达、NF-κB活性及[Ca2+]in的影响,旨在阐明人气道上皮细胞hBD-2表达的信号转导途径及影响因素,探讨hBD-2可诱导表达机制,为通过人工诱导方法增强内源性hBD-2表达发挥其药理抗菌活性治疗呼吸道感染及解决细菌耐药问题提供实验依据。方法1.采用人肺叶或肺段支气管,用蛋白酶ⅩⅣ消化加机械刮刷法分离上皮细胞,用添加必需营养因子的DMEM/F12无血清培养基,体外原代培养HBECs,并用细胞角蛋白作免疫细胞化学鉴定培养的HBECs。