目的：　　聚合酶链式反应（PCR）的出现，使得体外快速地检测微量的DNA成为可能。随着PCR技术的发展，PCR已经成为核酸分子诊断领域不可缺少的工具，被应用于生物医学研究和疾病诊断。但是由于PCR需要昂贵的热循环仪、具有专业知识的操作人员以及较大的运行空间，阻碍了其在临床诊断上的广泛应用。等温核酸扩增是在恒温反应条件下进行的核酸扩增技术，具有扩增效率高、操作简单以及成本低廉等优点。本研究基于等温核酸扩增技术设计了一种分子信标嵌入式挂锁探针（MB-PP），以K-ras基因为检测靶标，在恒温的反应条件下快速高灵敏地检测K-ras基因及其12密码子的单碱基突变，为癌症相关基因的快速检测和肿瘤的早期诊断提供新思路。　　方法：　　1.在wild typeK-ras基因存在下，高保真连接酶Taq DNAligase催化MB-PP的5’臂端和3，臂端形成磷酸二酯键，从而使线性MB-PP转为环状分子信标嵌入式挂锁探针（CMB-PP），达到检测单碱基突变的目的。　　2.形成的CMB-PP在引物的作用下，以CMB-PP为模板，引发滚环扩增反应（RCA）；随后在切口酶（nickase）和klenow fragment聚合酶的协同作用下，环形模板上发生环形链置换扩增（C-SDA）；C-SDA周期性产生两种切割片段，切割片段1（NF1）和切割片段2（NF2）；NF2可直接结合线性MB-PP的发夹结构区，从而使预先淬灭的荧光基团 FAM的荧光恢复，NF1在反应中可作为引物，结合线性MB-PP，引发新的线性链置换扩增（L-SDA）产生大量的NF2，从而达到级联指数型信号放大作用。　　3.在反应结束后，在波长492 nm的激发波作用下，通过扫描500-600 nm的发射波荧光强度，以518 nm处的荧光峰值来评价MB-PP检测系统的检测能力。　　结果：　　1.本检测系统通过切口酶调节的滚环扩增反应（N-RCA），引发 C-SDA和 L-SDA两种级联核酸扩增反应，最终达到高灵敏检测靶标的目的。利用本检测系统，可快速地对K-ras基因进行检测，检测下限达50 pM，线性范围为0.05 nM-10 nM，相关系数为0.9887。　　2.本检测系统能很好地检测K-ras基因单碱基突变，以K-ras基因12密码子的第二个碱基G为检测对象，将其分别突变为C、A和T，突变序列在反应中引起的荧光强度与野生型序列具有明显差异。含突变碱基C、A和T的突变序列引起的荧光强度分别是野生型的66％、70%和53%。　　结论：　　1.我们设计的MB-PP整合了分子信标和挂锁探针的特性，基于等温核酸扩增技术，能高灵敏地检测靶标，并且能轻易的区分目标序列的单碱基突变；在恒温的条件下就能完成反应，不需要昂贵的热循环仪，检测时间短，操作简单，这为癌症相关基因的快速检测提供新方法。　　2.本研究首次提出N-RCA和C-SDA概念，并且证明了环形链置换扩增的可行性，对经典的线性链置换扩增进行了补充，为等温核酸扩增检测领域提供了新的理论基础。