【摘 要】
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刺苋(Amaranthus spinosus L.)为苋科、苋属一年生草本植物。分布广泛,多常见于路边、旷地和园圃中。刺苋花粉外壁粗糙,呈球状,具散孔,在空气中具有较高的浓度。在我国华南地
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刺苋(Amaranthus spinosus L.)为苋科、苋属一年生草本植物。分布广泛,多常见于路边、旷地和园圃中。刺苋花粉外壁粗糙,呈球状,具散孔,在空气中具有较高的浓度。在我国华南地区,刺苋花粉是一种重要的吸入性变应原,其过敏原组分复杂且能与人血清中的特异性IgE发生结合,从而引发I型变态反应,使人患上如支气管哮喘或变应性鼻炎等疾病。此前,我们在克隆了刺苋花粉泛过敏原基因后,通过理论分析确定了其中的一个克隆Prf23为过敏原性较低的克隆。本研究采用原核系统根据不同的诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度以及菌密度来优化大肠杆菌Roseita (DE3)对重组刺苋花粉过敏原Prf23的高效表达,并以Western blot来鉴定其过敏原性。结果得出,通过调整刺苋花粉过敏原Prf23的诱导表达条件,发现当菌密度OD600值达到0.6时,加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG,于25℃下诱导6 h可明显提高重组过敏原Prf23的表达量(此优化表达条件被进一步通过表达重组花粉过敏原Prf7所确证)。经Western blot检测证实刺苋花粉过敏原Prf23能与刺苋花粉过敏患者血清中的特异性IgE结合。本研究优化表达了刺苋花粉过敏原Prf23并证实其具有过敏原性,为刺苋花粉过敏原的过敏原性改造及其标准化奠定了基础。
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