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第一部分趋化因子受体CXCR7/RDC1在乳腺癌细胞株中的表达及意义目的:探讨趋化因子受体CXCR7在不同乳腺癌细胞株中的相对表达强度及意义。方法:采用RT-PCR、western blotting等方法检测6株乳腺癌细胞株中趋化因子受体CXCR7在mRNA水平及蛋白水平上的表达情况。结果: CXCR7在6株乳腺癌细胞中的表达水平存在明显差异,其mRNA在6株乳腺癌细胞株中均可检出,ER(+)细胞株在蛋白水平上的表达明显高于ER(-)细胞株(P<0.01)。结论: CXCR7/RDC1与乳腺癌的发生、发展及预后有一定的相关性。第二部分成熟脂肪细胞对乳腺癌细胞及前列腺癌细胞生物学行为的影响目的:研究在正常状态及在缺氧条件下的成熟脂肪细胞对乳腺癌细胞及前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法:收集脂肪细胞在正常状态下分泌的上清液(Ad-CM)及在缺氧条件(0.1%O2)下分泌的上清液(Hy Ad-CM),应用该上清液处理癌细胞。采用迁移和侵袭实验检测癌细胞转移能力;免疫荧光法观察细胞的形态学改变;实时荧光定量PCR、ELISA检测缺氧条件下脂肪细胞中及脂肪细胞分泌液中各趋化因子的表达情况; Western blot、实时荧光定量PCR检测在缺氧条件下缺氧诱导因子在脂肪细胞中的表达情况; MTT法检测分泌液对癌细胞增殖作用的影响。结果:①脂肪细胞分泌的上清液可以刺激肿瘤细胞的迁移、侵袭和增殖能力并使癌细胞发生形态学改变,在缺氧条件下作用更加明显;②在缺氧环境下脂肪细胞中缺氧诱导因子HIF-1α表达增强并上调Glut-1,VEGF等基因的表达;③趋化因子CCL5在缺氧下表达增强可能与调节癌细胞迁移和转移有关。结论:脂肪细胞作为一种高活性的内分泌细胞,可通过分泌各种生物活性因子在肿瘤微环境中促进肿瘤细胞的生长、侵袭、转移等生物学行为,缺氧条件下可增强这些生物学行为。第三部分肿瘤抑制基因原钙粘连蛋白PCDH10在乳腺癌中甲基化状态的研究目的:研究PCDH10在乳腺癌中的作用和确定是否其启动子的高甲基化为其失活的主要机制。方法:采用半定量PCR检测PCDH10在9株乳腺癌细胞中mRNA的表达情况;甲基特异性PCR(MSP)及亚硫酸氢钠测序法(BGS)分析乳腺癌细胞及乳腺癌原发肿瘤、癌旁组织和正常乳腺组织标本中PCDH10的甲基化水平;用DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-2’- deoxycytidine联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA药物处理使细胞去甲基化,RT-PCR检测用药后PCDH10的表达情况,MSP、BGS检测用药前后甲基化和非甲基化水平的变化;最后将编码PCDH10的表达载体导入缺失表达PCDH10的乳腺癌细胞中,克隆形成实验观察PCDH10对乳腺癌细胞的抑瘤能力。结果:①半定量PCR显示PCDH10在78%的乳腺癌细胞中转录被沉默或减少;②MSP、BGS检测到在乳腺癌细胞及原发肿瘤中PCDH10启动子发生频繁甲基化(分别为67%和62%),但在癌旁组织及正常乳腺组织标本中几乎没有发生;③去甲基化药物处理后PCDH10表达水平恢复或明显增强,并且甲基化水平降低,非甲基化水平增强;○4外源性表达PCDH10显著减少乳腺癌细胞克隆形成率(下降70%-80%, p<0.01),表明PCDH10具有抑制乳腺癌细胞生长的作用。结论:原钙粘连蛋白PCDH10在乳腺癌中因启动子的频繁甲基化而表达沉默,PCDH10对乳腺癌细胞生长有抑制作用。PCDH10可能在乳腺癌的发生和发展中起重要作用,可能作为乳腺癌诊断的新的肿瘤标志物。