ORAI1与结肠癌细胞系SW480生物学特性关系的研究

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目的:应用RNA干扰技术沉默ORAI1基因的表达,探讨ORAI1对结肠癌细胞系SW480增殖、转移的影响及其机制。方法:以重组慢病毒感染SW480细胞,实验设对照组、空病毒组、干扰组,分别用实时荧光定量PCR和Western- blot检测三组细胞中ORAI1基因mRNA和蛋白的表达变化,MTT法、平板克隆、倍增时间检测三组细胞的增殖情况;Transwell小室、粘附实验、血管形成及拟态分别检测细胞侵袭、迁移能力,同、异种细胞间粘附及血管生成能力;流式细胞仪检测其周期变化,激光共聚焦显微镜检测三组细胞中钙库调节的钙内流SOCE的差异,Western-blot法检测三组细胞中ERK1/2、p-ERK1/2、CyclinD1、MMP-2、VEGF和E-cadherin蛋白的表达结果:SW480转染ORAI1干扰慢病毒72h后,可见明显的荧光表达;较空病毒组和对照组,干扰组细胞ORAI1的表达明显降低(P<0.01),细胞生长减慢(P<0.05),克隆形成能力减弱(P<0.01),倍增时间延长(P<0.01);细胞侵袭和迁移能力减弱(P<0.01);同种细胞粘附能力增强(P<0.05);异种细胞粘附能力减弱(P<0.05);血管生成能力减弱(P<0.01);G1期细胞比例显著增高(P<0.05);SOCE内流峰值降低(P<0.05);p-ERK1/2、CyclinD1、MMP-2和VEGF的表达降低(P<0.01)、E-cadherin表达增加(P<0.01)。结论:ORAI1可以促进结肠癌细胞系SW480的增殖和转移,其机制可能与SOCE增加有关。
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