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肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)是近几年来发现的骨骼肌生长的负调控因子,其活性的丧失,会引起动物肌肉的过度发育,肌纤维直径变大或肌纤维数增加,表现为动物的“双肌”性状。在小鼠、狗、牛和人类中MSTN突变的个体均表现出骨骼肌过度发育的表型。本研究对基因组定点编辑技术与体细胞克隆技术结合获得的MSTN基因单侧突变(MSTN+/-)和双侧突变(MSTN-/-)的猪进行生理生化指标等检测,为基因改良瘦肉型品种猪的培育提供基础性数据。研究内容及结果主要包括以下几个方面:为了鉴定在基因敲除猪中MSTN基因表达及观察其表达水平的变化,采用逆转录(ReverseTranscriptionPCR,RT-PCR)的方法,检测 MSTN,卵泡抑素(Follistatin),核心蛋白多糖(Decorin),以及可溶性受体ActRIIB在背最长肌与股二头肌中的表达情况。MSTN基因缺失后,Follistatin、Decorin与ActRⅡB在MSTN+/-猪与MSTN-/-猪背最长肌中均有不同程度表达;在MSTN+/-猪的股二头肌中除Follistatin只有少量表达以外,Decorin与ActR IIB均无表达,Follistatin、Decorin与ActRIIB在MSTN-/-猪股二头肌中均无表达。经过对三种猪即野生型WT、MSTN+/-和MSTN--猪的血液检测及分析,发现野生型猪(18.4±0.55)与MSTN+/-猪(12.25±0.32)、MSTN-/-猪白细胞总数(12±0.15)比较各有显著性差异(P<0.05);但是MSTN基因敲除猪之间比较白细胞总数无显著性差异(P>0.05);野生型猪(22±1.95)、MSTN+/-猪(15.9±0.92)与MSTN--猪中性粒细胞百分比(18.7±1.72)比较结果表明三者互相均有显著性差异(P<0.05)。采取三种猪的尿液进行检测后发现三组猪的尿胆原含量、潜血含量、蛋白质含量与白细胞含量均显示为可忽略的疑似阳性反应(“±”号);其余胆红素、酮体、亚硝酸盐、葡萄糖含量均显示为阴性反应,表明数值完全正常,并且尿液pH值均在正常范围内(pH=7.0)。综上所述,虽然在上述指标中部分血液指标在MSTN基因敲除猪与野生型猪之间存在显著的差异,但是所有指标均在健康猪正常范围内。因此初步判定MSTN基因敲除猪与该同种野生型猪的指标均为正常。