目的:1.挖掘《伤寒杂病论》火热思想,为李赛美教授泻火固正法纯中药治疗2型糖尿病（T2DM）提供理论支撑。2.研究基于“火热论”的李赛美教授泻火固正法纯中药治疗新诊断T2DM的临床疗效与安全性。3.预测泻火固正法核心方汉唐平（HTP）改善T2DM胰岛β细胞病变的潜在作用机制。4.研究HTP对db/db小鼠胰岛β细胞去分化的影响。5.根据预测结果,验证HTP改善糖脂毒性下β细胞去分化的调控机制。方法:1.基于古今医案云平台探讨《伤寒杂病论》方药火热思想收集《伤寒论》和《金匮要略》中火热相关方药,构建“《伤寒杂病论》火热相关方证数据库”。然后利用古今医案云平台的“数据挖掘分析”功能模块,进行单味药频次统计、性味归经统计、功效统计、关联分析、聚类分析、社团分析、复杂网络分析。2.基于“火热论”的李赛美教授泻火固正法纯中药治疗新诊断T2DM的疗效与安全性收集符合条件的李赛美教授泻火固正法纯中药治疗的新诊断T2DM病例,采集治疗前、治疗3个月和6个月的糖化血红蛋白（Hb A1c）、口服葡萄糖耐量试验（OGTT）、胰岛素释放试验、血脂、尿酸、肝肾功能、不良反应。比较治疗前后主要评价指标:Hb A1c、胰岛素抵抗指数（HOMA2-IR）、胰岛β细胞功能指数（HOMA2-β）;次要评价指标:OGTT曲线下面积(AUCOGTT)、胰岛素曲线下面积(AUCINS)、血脂及尿酸水平、不良反应等。3.基于系统药理学和生物信息学预测HTP改善T2DM胰岛β细胞病变的潜在作用机制采用系统药理学方法检索泻火固正法核心方HTP的中药化学成分和靶点,利用生物信息学方法鉴定与T2DM胰岛β细胞病变相关的基因,然后将HTP的靶点和T2DM胰岛β细胞病变相关的基因取交集,重叠的基因即为HTP治疗T2DM胰岛β细胞病变的靶点基因。再用交集靶点构建PPI网络、中药-成分-靶点网络、GO功能富集和KEGG通路富集,预测HTP改善T2DM胰岛β细胞病变的潜在作用机制。4.HTP对db/db小鼠胰岛β细胞去分化的影响将50只6-8周龄的db/db小鼠随机平均分为模型组、二甲双胍组和HTP低、中、高剂量组,10只C57小鼠为正常组。采用相应药物干预8周,比较各组24h饮水量、进食量、尿量及Lee’指数、腹腔注射葡萄糖耐量试验升高的血糖曲线下面积(△AUCIPGTT)、腹腔注射胰岛素耐量试验降低的血糖曲线下面积(△AUCIPITT)、脂肪脏器指数,HE染色观察胰腺病理变化,免疫印迹法检测β细胞成熟标志物（INS、Maf A、Pdx-1）及去分化为前体细胞标志物（Nanog、Ngn3）的蛋白表达水平。5.基于PI3K-Akt-FoxO1通路探讨HTP改善糖脂毒性下β细胞去分化的机制采用CCK8法和葡萄糖刺激胰岛素分泌（GSIS）法构建合适的MIN6细胞高糖高脂培养环境及干预时间,制备并摸索HTP含药血清合适的稀释倍数,然后采用免疫印迹法分别检测正常组、高糖高脂模型组、HTP含药血清组、PI3K抑制剂组的β细胞成熟标志物（INS、Maf A、Pdx-1）、去分化前体细胞标志物（Nanog、Ngn3）、PI3K-Akt-FoxO1通路关键蛋白（p-Akt、Akt、p-Fox O1、Fox O1）的表达水平。结果:1.基于古今医案云平台探讨《伤寒杂病论》方药火热思想《伤寒杂病论》火热相关方药主治的火热证可分为实火、阴火、夹杂火、虚火和浮火,在“观其脉症,知犯何逆,随证治之”的辨证论治观念指导下,火热方药的性味功效主以苦寒泻火祛邪,重视甘温补通扶正,归经遍及六经,强调肺、脾、胃肠、肝胆、肾,药物间关联密切,配伍精当,蕴含了寒者热之,热者寒之,寒温并用,祛邪扶正的治疗思想,最终达到火热去,正气固,病证愈的目的。2.基于“火热论”的李赛美教授泻火固正法纯中药治疗新诊断T2DM的疗效与安全性共纳入满足条件的病例47例。与治疗前相比,治疗3个月或6个月后,Hb A1c、AUCOGTT、Tg、LDL-C均明显下降（P<0.001,P<0.01,P<0.05）;HOMA2-β明显升高（P<0.01,P<0.001）;与治疗3个月相比,治疗6个月后Hb A1c和AUCOGTT明显下降（P<0.05）。总有效率91.7%,未见明显不良反应。3.基于系统药理学和生物信息学预测HTP改善T2DM胰岛β细胞病变的潜在作用机制HTP改善T2DM胰岛病变的潜在作用机制复杂。相关中药活性成分71个,作用靶点63个,生物过程701个,细胞组分69个、分子功能77项,信号通路110条,包括Fox O通路、PI3K-Akt通路等。4.HTP对db/db小鼠胰岛β细胞去分化的影响与正常组比较,模型组、二甲双胍组及HTP低、中、高剂量组的24h饮水量、进食量、尿量及脂肪脏器指数、△AUCIPGTT均明显增大,△AUCIPITT明显减少（P<0.001）;与模型组比较,二甲双胍组和HTP低、中、高剂量组的饮水量、进食量、尿量、脂肪脏器指数、△AUCIPGTT均明显减少,△AUCIPITT明显增大（P<0.01,P<0.001,P<0.05）。与正常组比较,模型组和HTP低、中剂量组的Lee’s指数明显升高（P<0.001,P<0.01,P<0.05）;与模型组比较,二甲双胍组和HTP中、高剂量组的Lee’s指数显著降低（P<0.05）。与正常组比较,其余各组小鼠可见明显胰腺病变,包括胰岛玻璃样变、胰岛萎缩、腺泡细胞空泡变性、小叶导管增生、胰腺炎、坏死、胰腺萎缩。以模型组病变数目最多、范围最广、形式多样而严重,通过二甲双胍或HTP治疗后,可以减轻胰腺病变。在INS、Maf A、Pdx-1蛋白表达方面,与正常组比较,模型组的表达明显减弱（P<0.001）;与模型组比较,其余各组的表达均明显增强（P<0.001）;在Nanog、Ngn3蛋白表达方面,与正常组比较,模型组的表达均明显增强（P<0.01）;与模型组比较,二甲双胍组及HTP低、中、高剂量组的表达均明显减弱（P<0.01,P<0.001,P<0.05）。5.基于PI3K-Akt-FoxO1通路探讨HTP改善糖脂毒性下β细胞去分化的机制CCK8和GSIS实验表明以6g/L葡萄糖+0.2 mmol/L PA,干预6小时对细胞存活率影响较小但抑制胰岛素的分泌作用强。由于去分化的胰岛β细胞具有活细胞和无胰岛素分泌功能的特点,综合细胞存活率和GSIS实验,我们选择该条件作为诱导胰岛β细胞去分化的高糖高脂毒性培养体系。采用同样的方法,发现HTP含药血清20倍稀释对糖脂毒性下β细胞存活率影响较小但促进胰岛素分泌作用强,故选择该稀释倍数作为干预浓度。在INS、Maf A、Pdx-1表达方面:与正常组比较,模型组和抑制剂组表达明显减弱（P<0.001,P<0.01）;与模型组比较,HTP含药血清组表达明显增强（P<0.001,P<0.01）;与HTP含药血清组比较,抑制剂组表达明显减弱（P<0.001,P<0.01）。在Nanog和Ngn3蛋白表达方面:与正常组比较,模型组、HTP含药血清组和抑制剂组的表达明显增强（P<0.001）;与模型组比较,HTP含药血清组和抑制剂组的表达明显减弱（P<0.001,P<0.01）;与HTP含药血清组比较,抑制剂组的表达均明显增强（P<0.01）。在PI3K-Akt-FoxO1通路关键蛋白表达方面:p-Akt/Akt:与正常组比较,模型组和抑制剂组的表达明显减弱（P<0.001）;与模型组比较,HTP含药血清组和抑制剂组的表达均明显增强（P<0.001）;与HTP含药血清组比较,抑制剂组的表达明显减弱（P<0.001）。p-Fox O1/Fox O1:与正常组比较,模型组、HTP含药血清组和抑制剂组的表达明显减弱（P<0.001,P<0.01）;与模型组比较,HTP含药血清组和抑制剂组的表达均明显增强（P<0.001）;与HTP含药血清组比较,抑制剂组的表达明显减弱（P<0.001）。结论:李赛美教授泻火固正法纯中药治疗T2DM安全有效,其火热思想与《伤寒杂病论》有深厚渊源,相关潜在机制复杂,通过激活PI3K-Akt-FoxO1信号通路以改善胰岛β细胞去分化为其可能的作用机制之一。