论文部分内容阅读
枝角类的生活史特殊,具有孤雌（无性）生殖和两性（有性）生殖两种方式。通常在外界条件比较适宜时,行孤雌生殖（无性生殖）；当环境因素胁迫,如温度变化,食物匾乏,水溞密度过大等导致生存环境不利时,生殖模式即过渡为有性生殖,当环境适宜时休眠卵再萌发产生孤雌溞,以保持枝角类种族的延续。针对枝角类在生殖生物学方面的研究,主要集中在生态因子对枝角类生殖转化的影响,对枝角类生殖转化分子机理方面的研究较少。因此,研究明晰枝角类繁殖的转换机制,具有重要的理论意义,同时可实现人工控制枝角类的繁殖改变,在水产养殖业上具有广泛应用价值。本研究首次克隆得到蚤状溞衰老相关蛋白DpSAP基因cDNA和隆线溞表皮蛋白CP因cDNA全长序列。蚤状溞DpSAP基因编码117个氨基酸；生物信息学分析显示,DpsAP蛋白包括一个N-糖基化位点,无信号肽；多序列比对分析表明,蚤状溞DpsAP基因编码的氨基酸序列与其他物种的同源基因编码的氨基酸序列相似性较低；系统进化树分析结果显示,DpSAP与其它物种SAP距离较远。导致以上结果可能是针对甲壳动物SAP基因的研究较少有关。隆线溞CP因编码219个氨基酸；生物信息学分析表明,CP蛋白包含一个由15个氨基酸组成的信号肽,一个Chitinbind4结构域,不含明显的活性位点；多序列比对分析显示,隆线溞CP和大型溞的同源性最高,与其它物种CP相比较同源性较低。系统进化树分析显示,隆线溞CP蛋白的进化地位与其生物学分类地位相吻合。以上结果都证明了本文获得的隆线溞CP基因cDNA全长的正确性。实时定量PCR分析发现,DpSAP基因在两性溞中表达量最低,在早期两性雌溞中表达量最高。ppSAP在孤雌幼溞和后期两性雌溞中的表达量有显著差异,在成年孤雌溞和早期两性雌溞中的表达量具有极显著差异,这揭示了DpSAP基因很可能跟蚤状溞的生殖转化过程相关。RT-PCR半定量结果表明,CP基因在孤雌溞与两性溞体内均可以进行表达,然而,在两性溞体内该基因表达量显著高于孤雌溞体内的表达量,这表明CP基因很可能在隆线溞生殖转化中发挥作用。本研究利用整体原位杂交技术对枝角类生殖转化相关功能基因DpSAP和CP在孤雌溞和两性溞中进行了定位分析,在蚤状溞孤雌溞和两性溞中,SAP因都是在溞体第二触角关节处表达,这暗示着DpSAP基因很可能参与了蚤状溞的生殖转化过程；在隆线溞孤雌溞和两性溞中,CP基因表达的部位不同,而且在两性溞中的表达量要比孤雌溞中的多,这与CP基因的半定量RT-PCR实验结果相一致,也说明CP基因很可能在隆线溞生殖转化过程中起一定作用。