旋毛虫（Trichinella spiralis）是一种重要的人畜共患食源性寄生虫，对人和动物均有明显的致病性，能感染人和100多种哺乳动物、鸟类及爬行动物。该病呈世界性分布，人类疫病的暴发流行在不同的国家都常有报道，现已报道过的国家超过55个，其中不乏发达国家，目前，世界上估计超过1100万人感染了旋毛虫病。虽然阿苯达唑可以有效杀灭肠内早期脱囊幼虫、成虫及移行期幼虫，但由于该病临床表现复杂，特别在感染早期或轻度感染时由于临床症状并不典型，容易被忽视或误诊，从而延误救治时机而引起重大损失，因此对旋毛虫病进行准确的诊断并及时治疗是控制该病比较有效的方法。　　 随着蛋白质技术及分子生物学技术的不断发展，及人们对检测要求的提高，各种检测技术不断被研究开发，如PCR、ELISA、RIA等等，但也都存在一定的不足，特别是操作复杂及需要仪器辅助，限制了其应用范围。一步快速诊断试纸法是目前操作最简单、诊断最快的检测技术，且诊断材料易于保存，敏感性和特异性亦均能满足实验要求，易于在基层推广，是未来发展及应用空间比较大的一种检测方法。旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子是一种蛋白酶抑制剂，是生物体主要的调节蛋白之一，在寄生虫致病过程中起着重要作用。该基因在旋毛虫各个发育时期都有表达，有望作为猪旋毛虫病的候选诊断抗原。本研究的目的:(1)分析旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子（Serpin）基因表达蛋白的抗原性;(2)利用该蛋白研制旋毛虫胶体金免疫层析试纸条。　　 根据GenBank中的旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serpin)基因序列设计一对引物，扩增目的基因片段，构建原核表达质粒pET30a-ser，并转化至大肠杆菌BL21，以异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达，并通过SDS-PAGE电泳及Western blot分析表达蛋白的大小及抗原性，同时筛选最佳纯化条件。将纯化后的蛋白免疫新西兰兔，获得抗Serpin的多克隆抗体，利用Western blot及ELISA法检测多抗的特异性及效价，并用饱和硫酸铵沉淀法纯化多抗IgG。结果显示，克隆得到的丝氨酸蛋白酶抑制因子基因约1.1kb，经测序及分析，其完整的开放阅读框为1122 bp，编码373个氨基酸，与GenBank中的Serpin基因相对比，仅有一个碱基发生突变，相似性达99.9％，但编码的氨基酸完全相同。将重组菌诱导表达后，经SDS-PAGE分析，重组蛋白约为46.6 kD，用镍琼脂糖凝胶FF方法纯化蛋白，以200 mM尿素洗涤时，得到比较纯的蛋白。通过Western-blot方法对重组蛋白的抗原性进行研究表明，重组蛋白能被旋毛虫感染150天的阳性猪血清特异性识别，而与健康猪血清无反应，说明具有良好的抗原性。得到的多克隆抗体，效价＞1(∶)51200，且具高特异性。　　 本研究采用柠檬酸三钠还原法制备20 nm的胶体金颗粒，并以胶体金标记重组蛋白，用纯化的多抗IgG及SPA在硝酸素纤维膜上分别包被C线及T线，采用双抗原夹心法设计制备免疫层析试纸条。以制备的试纸条进行血清检测，发现将阳性猪血清稀释到500倍依旧可检到阳性，且与猪瘟、猪蓝耳病等一部分猪其他病症的阳性血清均无交叉反应，不同批次制备的试纸条之间检测结果一致，说明该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便、重复性好等优点，适用于生产一线基层使用。　　 综上所述，原核表达的得到旋毛虫Serpin具有良好的抗原性，能被旋毛虫感染猪血清特异性识别，以该蛋白制备的胶体金免疫层析试纸条具有较好的特异性、敏感性、稳定性及可重复性，为旋毛虫病的诊断提供了新的方法，对动物旋毛虫感染的活体检测具有重要的现实意义。