龙血竭提取物是龙血竭经乙酸乙酯回流提取,碱溶酸沉制备得到的有效部位,具有抑制体外ADP及PAF诱导的血小板聚集、保护局灶性脑缺血组织、降低缺血性大鼠的脑含水量等作用,且无明显的毒副作用。该有效部位含有黄酮类、芪类、甾体皂苷等脂溶性成分,不溶于水。本课题以龙血竭提取物为研究对象,采用固体分散技术改善其水溶性,并评价龙血竭提取物固体分散体在大鼠体内的相对生物利用度。实验过程中,对龙血竭提取物进行了系统分离,并对所得成分的药理活性进行了研究,在此基础上建立了龙血竭提取物中5个成分的含量测定方法及体外溶出评价方法,考察了龙血竭提取物固体分散体的制备工艺,并在药物动力学研究的基础上评价了其在大鼠体内的相对生物利用度。一、龙血竭提取物成分的分离及化学成分药理活性的考察1龙血竭提取物化学成分的初步研究采用硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱、ODS柱色谱以及重结晶等分离方法,对龙血竭提取物化学成分进行了研究,从中分离得到7个化合物,分别为龙血素A、龙血素B、7,4’-二羟基黄酮、菜油甾醇、紫檀芪、芹菜素和白藜芦醇;利用Q-TOF-MS对龙血竭提取物进行定性研究,推测出另外10个化合物的可能结构。将17个化合物在龙血竭提取物总离子流图和紫外图谱中进行了指认。2龙血竭提取物化学成分药理活性的考察考察了分离得到的化合物对体外ADP诱导的血小板聚集的抑制作用及对缺氧脑细胞的保护作用。结果表明白藜芦醇、龙血素B具有抑制体外ADP诱导的血小板聚集的作用,其它化合物作用不明显;龙血素A、龙血素B、7,4’-二羟基黄酮对缺氧脑细胞具有一定的保护作用,其它化合物作用不明显。二、龙血竭提取物固体分散体的制备1龙血竭提取物中5个成分含量测定方法的建立建立了龙血竭提取物中龙血素A、龙血素B、7,4’-二羟基黄酮、紫檀芪、白藜芦醇的含量测定方法,并进行了方法学考察,表明该方法稳定可行,可用于5个成分的含量测定。2龙血竭提取物体外溶出条件的考察以龙血素A、龙血素B、7,4’-二羟基黄酮、紫檀芪、白藜芦醇的累积溶出度为评价指标,考察了龙血竭提取物的体外溶出条件,确定为:采用《中国药典》2010年版二部附录XC小杯法测定,溶出介质为0.20 mol·L-1十二烷基硫酸钠溶液,介质体积为100 ml,介质温度为37℃±0.5℃,转速为100r·min-1,从投入龙血竭提取物(胶囊)开始计时,分别在6、10、15、30、45 min取样2 ml,0.45μm滤膜过滤,每次取样后补加同体积同温度的溶出介质。3龙血竭提取物固体分散体的制备以龙血素A、龙血素B、7,4’-二羟基黄酮、紫檀芪、白藜芦醇的累积溶出度为评价指标,采用单因素试验,确定固体分散体的制备工艺为:按1:3比例准确称取药物和载体PVP-K30(共12 g),置于具塞锥形瓶中,加入150 ml 80%乙醇,超声45 min使完全溶解,于旋转蒸发仪上(55℃)回收溶剂,取内容物,置于蒸发皿中,于60℃真空干燥箱中干燥4h,取出,研细,过40目筛,即得。对3批龙血竭提取物固体分散体的性状、水分、累积溶出度进行考察,发现均没有显著性差异,表明制备工艺稳定可行。初步稳定性考察结果表明,龙血竭提取固体分散体应保存在干燥的环境中;采用红外光谱法、差示扫描量热法对固体分散体进行质量评价,红外光谱结果表明,制备固体分散体的过程中没有发生化学反应;差示扫描量热法结果表明,龙血竭提取物与PVP-K30形成低共熔混合物,以微晶状态存在于PVP-K30中。对龙血竭提取物及其固体分散体的溶解度及溶出度进行比较,发现固体分散体中5个检测指标的溶解度、溶出速度和溶出度均得到不同程度的提高。三、龙血竭提取物固体分散体大鼠体内相对生物利用度的考察建立了空白血浆中龙血素A、龙血素B、7,4’-二羟基黄酮、紫檀芪、白藜芦醇的含量测定方法,并进行了方法学考察。对龙血竭提取物及其固体分散体大鼠体内药物动力学进行研究,发现制备为固体分散体后,5个检测指标吸收程度均有所增加,且生物利用度均得到不同程度的提高,相对生物利用度依次为154.3%、164.3%、127.2%、178.3%、130.5%。