黑曲霉脂肪酶的分离纯化及其性质研究

被引量 : 0次 | 上传用户:baishuitylh
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
微生物脂肪酶已成为脂肪酶工业应用的主要来源。随着人们对微生物脂肪酶认识的不断加深,应用范围正在不断拓宽,对酶的耐受性(极端温度、压力)要求也越来越高,发掘具有特殊酶学性质的脂肪酶具有很大的工业应用价值。本研究以从西藏传统食品中筛选得到的一株产脂肪酶的黑曲霉菌株,对其产酶发酵条件优化,从发酵液中分离纯化得到脂肪酶并探讨了其酶学性质。主要的研究内容和结果如下:(1)以从西藏传统食品中分离得到的一株产胞外脂肪酶菌株,通过形态分析和分子鉴定,确定其为黑曲霉,命名为AN0512。优化了AN0512的产酶条件,结果表明,采用植物油1%(v/v)、酵母提取物1%(w/w)、KH2PO40.2%(w/w)、MgSO40.05%(w/w)、KCl0.05%(w/w)等组成的培养基,接种量为1.5%(v/v)时,在28℃、180r/m下培养96h后,发酵液中脂肪酶水解活性最大达到30IU/mL。(2)对粗酶性质研究发现,其最适温度和pH分别为30℃、pH7.0。在60℃时粗酶仍保留60%以上的脂肪酶水解活性,显示其较好的耐热性;Ca2+、Fe2+、Co2+、Mg2+、Mn2+能促进粗酶的水解活性。(3)经过硫酸铵沉淀、离子交换柱层析和凝胶过滤柱层析,从黑曲霉发酵液中分离纯化了脂肪酶,脂肪酶的酶活回收率为22.1%,纯化倍数为203倍。获得的脂肪酶在SDS-PAGE图谱上显示为单条带,分子量约为41kDa。经MALDI-TOF-MS鉴定,该脂肪酶与黑曲霉CBS513.88酯酶具有较高的同源性。(4)酶的最适反应温度为50℃,在20-60℃内有较好的稳定性,60℃处理12h仍残留90%的酶活;最适反应pH为5.0,在pH3.0-5.0内具有较好稳定性,pH3.0时处理20h仍存有99%的酶活。Cu2+、Ca2+对酶活有较大促进作用,而Fe2+基本使酶完全失活;多种极性较大的有机溶剂对其有激活作用。脂肪酶表现出Sn-1(3)位置特异性;其对棕榈酸对硝基苯酯(p-NPP)显示出了较好的亲和力,米氏常数Km为10μmol/L,最大反应速度为5.1μmol min-1 mL-1
其他文献
土壤电阻率是电力设计中的重要参数,土壤电阻率值直接关系到电力设计安全。本文介绍了土壤电阻率测试的常用方法,重点分析了对称四极法的原理、仪器设备、计算公式和适用范围
以中国传统审美文化为出发点,将视角兼及具体致用与抽象运用两大方面,以上、下两篇的格局梳理出"相反相成"这一文化特质,对于中国传统建筑意匠试加探讨。上篇偏于审美意趣,分
该文研究了基于灰色模型结合小波变换的变形预测方法。根据小波变换特点,对变形监测数据序列进行分解,对各个分解后的子序列利用灰色模型进行预测,最后重构出变形预测结果,且
传统戏场空间是巴蜀大地上常见的一种空间类型,是传统戏曲表演的物质载体,它的发展与演变真实的反映着巴蜀人民的生活状态。从中我们能看见社会的发展、经济的繁荣、建筑技术
网络作为计算机发展带来的一项重要科技成果,给人们提供便捷生活的同时,也给人民提出了信息的使用和保护问题,这些问题向传统的著作权保护制度提出了挑战。在网络新时代,网络
文中指出了现有地壳同位素丰度资料存在的问题,并说明了需要重新计算地壳同位素丰度的原因。然后笔者根据新近采用区域地球化学方法算出的地壳元素丰度资料,通过地壳原子丰度
氧化锌避雷器是电力系统中的主要防雷保护设备,在日常维护中一般通过带电检测及离线测试的方法监测其工作状态。传统的氧化锌避雷器带电检测需要大量布线,操作麻烦且有一定的
传统单一的并行计算模型变得越来越复杂,对并行计算各阶段针对性不强、指导能力差的特点,为此提出了对并行计算模型分层研究的思想,依此把并行计算模型分为并行算法设计模型
纤维增强塑料(简称FRP)筋是一种新型的复合材料,本文介绍了FRP锚杆的特点,同时通过室内试验和现场试验,对其拉拔破坏模式、粘结强度、拉拔承载力、锚固反应与钢锚杆进行了对
术后恶心呕吐是手术主要的并发症,针灸干预对防治术后恶心呕吐疗效确切,但其作用机制尚未明确,"调衡"具有调节机体平衡,促使失衡的病理状态向平衡的生理状态转化的作用。针灸"调