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微生物脂肪酶已成为脂肪酶工业应用的主要来源。随着人们对微生物脂肪酶认识的不断加深,应用范围正在不断拓宽,对酶的耐受性(极端温度、压力)要求也越来越高,发掘具有特殊酶学性质的脂肪酶具有很大的工业应用价值。本研究以从西藏传统食品中筛选得到的一株产脂肪酶的黑曲霉菌株,对其产酶发酵条件优化,从发酵液中分离纯化得到脂肪酶并探讨了其酶学性质。主要的研究内容和结果如下:(1)以从西藏传统食品中分离得到的一株产胞外脂肪酶菌株,通过形态分析和分子鉴定,确定其为黑曲霉,命名为AN0512。优化了AN0512的产酶条件,结果表明,采用植物油1%(v/v)、酵母提取物1%(w/w)、KH2PO40.2%(w/w)、MgSO40.05%(w/w)、KCl0.05%(w/w)等组成的培养基,接种量为1.5%(v/v)时,在28℃、180r/m下培养96h后,发酵液中脂肪酶水解活性最大达到30IU/mL。(2)对粗酶性质研究发现,其最适温度和pH分别为30℃、pH7.0。在60℃时粗酶仍保留60%以上的脂肪酶水解活性,显示其较好的耐热性;Ca2+、Fe2+、Co2+、Mg2+、Mn2+能促进粗酶的水解活性。(3)经过硫酸铵沉淀、离子交换柱层析和凝胶过滤柱层析,从黑曲霉发酵液中分离纯化了脂肪酶,脂肪酶的酶活回收率为22.1%,纯化倍数为203倍。获得的脂肪酶在SDS-PAGE图谱上显示为单条带,分子量约为41kDa。经MALDI-TOF-MS鉴定,该脂肪酶与黑曲霉CBS513.88酯酶具有较高的同源性。(4)酶的最适反应温度为50℃,在20-60℃内有较好的稳定性,60℃处理12h仍残留90%的酶活;最适反应pH为5.0,在pH3.0-5.0内具有较好稳定性,pH3.0时处理20h仍存有99%的酶活。Cu2+、Ca2+对酶活有较大促进作用,而Fe2+基本使酶完全失活;多种极性较大的有机溶剂对其有激活作用。脂肪酶表现出Sn-1(3)位置特异性;其对棕榈酸对硝基苯酯(p-NPP)显示出了较好的亲和力,米氏常数Km为10μmol/L,最大反应速度为5.1μmol min-1 mL-1。