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目的:单倍体造血干细胞移植的出现为无同胞全相合供者的患者带来了一丝曙光,然而强化移植预处理方案导致的严重感染以及GVHD的发生限制了其在老年患者以及在造血系统肿瘤治疗中的广泛应用。目前临床上为减少GVHD的发生,主要采用移植前去除T细胞以及移植后使用免疫抑制剂的方法。尽管GVHD是可控的,但会明显增加移植物植入失败以及白血病复发的风险。研究表明GVHD的发生主要是由于DC加工处理和递呈抗原给供者T细胞所致,DC在供者T细胞介导的GVHD的发生中起到了关键性的作用。而异源反应性NK细胞可以通过杀伤受者的抗原提呈细胞(主要是DC),阻断抗原提呈通路,从而预防GVHD的发生。本实验通过研究不同组合KIR表型的NK细胞对DC的杀伤作用及KIR2DS4~+NK细胞对不同表型DC的杀伤情况,为KIR指导临床选择最优供者提供依据。方法:1.NK细胞的分选及培养:采用淋巴细胞分离液以及Rosettesep NK细胞富集混合物对健康供者外周血全血进行阴性选择从而分选出NK细胞,加入培养基中连续培养14天;2.DC细胞的分选及培养:利用淋巴细胞分离液采用梯度密度法提取单个核细胞,置于培养箱中孵育2h后弃去悬浮细胞,将贴壁细胞置于培养基中培养7天;3.检测不同分组NK细胞对DC的杀伤活性:采用CCK-8比色法检测不同KIR组合的NK细胞对DC的杀伤活性;4.对进行allo-HSCT患者临床病例资料进行分析,观察患者GVHD的发生情况。结果:1.NK细胞的鉴定:外周血中CD3-CD16+CD56+细胞占有核细胞比例由分选前的(21.90±7.25)%提高到(92.80±2.42)%;2.不同KIR组合NK细胞对DC的杀伤活性:KIR2DL1+2DS1+2DS4~+及KIR2DL1+2DS1+NK细胞较KIR2DL1+2DS4~+NK细胞杀伤活性强,差异有统计学意义(P<0.05);3.不同KIR单体型NK细胞对DC的杀伤活性:KIR B单体型NK细胞对DC的杀伤作用较KIR A单体型强,差异具有统计学意义(t=2.19,P<0.05);4.3例行allo-HSCT患者中,2例接受移植物为KIR B单体型的患者发生I度GVHD;1例供者为KIR A单体型患者发生了重度GVHD。结论:1.KIR2DS4~+NK细胞仍可介导对DC的杀伤;2.KIR2DS4与2DS1在NK细胞对DC的杀伤中可能起到了协同作用,在预防移植物抗宿主病的发生中起到一定作用。