白介素37对转化生长因子β1诱导的大鼠肝星状细胞的影响

来源 :泸州医学院 西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:miao4701730
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目的:观察重组人白细胞介素37(Interleukin37,IL-37)对转化生长因子β1(Transform Growth Factor-beta1,TGF-β1)诱导的活化大鼠肝星状细胞(rat hepatic stellate cell,HSC-T6)的增殖效应的影响,并观察其对HSC-T6表达的纤溶酶原激活抑制物1(PlasminogenActivator Inhibitor1,PAI-1)和平滑肌肌动蛋白α(Smooth MuscleActinα,SMA-α)表达的影响。初步探讨IL-37可能的抗肝纤维化作用及其机制。方法:1.不同细胞因子浓度培养基制备及实验分组:以改良杜氏伊格尔培养基(Dulbecco’s Modified EagleMedium,DMEM)为基础液配制,实验共分为5组,即空白对照组:仅含DMEM培养基;实验组A:含TGF-β1(5ng/ml),不含有重组IL-37b;实验组B、实验组C及实验组D含有与A组相同浓度的TGF-β1,且含有浓度梯度逐渐升高的重组人IL-37b(10ng/ml,100ng/ml,200ng/ml)。2.检测HSC-T6增殖及目标蛋白表达:在各组不同细胞因子浓度作用下HSC-T6培养12h、24h、48h后,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测HSC增殖情况;细胞爬片后,继续药物作用24小时,用免疫组化法检测不同组培养基作用后SMA-α、PAI-1表达情况。3.统计学处理:检测相同时间下,不同药物浓度细胞增殖情况及SMA-α、PAI-1表达情况,采用单因素方差分析;B组、C组及D组间比较细胞增殖抑制率,采用两因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。采用SPSS19.0统计软件进行数据分析。结果:1.对HSC-T6增殖抑制作用:在重组人IL-37b与TGF-β1共培养12h、24h、48h后,B组、C组、D组HSC-T6吸光度均低于A组,P值均小于0.05,差异有统计学意义,表明不同浓度重组人IL-37b在12h、24h、48h均有对活化的大鼠肝星状细胞增殖的抑制作用。在不同时间点的组内比较提示,在24h各组抑制作用明显,且不同浓度的抑制率不同,为浓度越高,抑制率越明显,P值<0.001,有统计学差异;在12h不同药物浓度组抑制率均低,且各组间抑制率差异无统计学意义,而在48h不同药物组的抑制率均较高,且各组间抑制率差异无统计学意义,P值>0.05,无明显统计学差异。2. IL-37对活化的HSC-T6表达SMA-α的影响:在IL-37b干预组的B组、C组、D组SMA-α表达量可较无IL-37b的A组干预组明显减少,且存在有剂量效应关系,IL-37b浓度越高对SMA-α表达抑制作用越明显,有统计学意义(P<0.05)。3.IL-37对活化的HSC-T6表达PAI-1的影响:在IL-37b干预组的B组、C组、D组PAI-1表达量可较无IL-37b的A组干预组明显减少,且存在有剂量效应关系,IL-37b浓度越高对PAI-1表达抑制作用越明显,有统计学意义(P<0.05)。结论:1.重组人IL-37b可抑制TGF-β1活化的HSC-T6增殖,且在作用24h有剂量效应关系,浓度越高对细胞增殖抑制作用越明显,而在12h及48h时无明显剂量效应关系;2.重组人IL-37b可抑制TGF-β1活化的HSC-T6表达SMA-α及PAI-1,在作用24h有剂量效应关系,浓度越高的IL-37b抑制作用越明显。总之本实验研究表明IL-37可能通过抑制HSC-T6细胞增殖及抑制其表达SMA-α、PAI-1发挥抗肝纤维化作用。
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