乙型肝炎病毒X蛋白对HL7702肝细胞增殖的影响及机制

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【目的】:1.探讨HBx蛋白的稳定表达对HL7702肝细胞增殖以及细胞中COX-2表达的影响。2.观察COX-2选择性抑制剂NS-398对HL7702/HBx细胞的影响,探讨COX-2在HBx蛋白促进肝细胞增殖中的作用。【方法】:HL7702/HBx细胞、HL7702/Mock细胞、HL7702细胞分别复苏和培养,CCK-8法和克隆形成实验观察和检测上述三种细胞增殖能力;以β-actin为内参,运用RT-PCR检测上述三种细胞中COX-2在mRNA水平的表达情况,Western blot检测COX-2在蛋白水平的表达情况;相同浓度COX-2选择性抑制剂NS398作用体外培养的各组细胞,并以DMSO组为空白对照,采用CCK-8法检测经处理24h、48h、72h后各组细胞的增殖活性;在50umol/L NS-398作用72h后,以DMSO作为对照组,Western blot检测各组细胞中COX-2蛋白的表达水平。【结果】:细胞增殖实验及克隆形成实验显示:与HL7702/Mock和HL7702两组细胞相比较,HL7702/HBx增殖能力更强(P<0.05),克隆形成率也更高(P<0.05)。通过对各组细胞COX-2mRNA的半定量RT-PCR检测发现,相对于HL7702/Mock细胞、HL7702细胞,转染HBV X基因的HL7702细胞内COX-2的mRNA相对表达量明显增高(P<0.05)。Western blot检测示:HL7702/HBx细胞中的COX-2蛋白相对表达水平较高(P<0.05),而HL7702/Mock及HL7702之间则无明显差异。NS-398能以时间依赖的方式抑制各组细胞的增殖能力,而在HL7702/HBx细胞中增殖抑制率在3个时间点均高于其他两组细胞(P<0.05)。经50μmol/LNS-398处理后,各组细胞的COX-2蛋白水平显著降低,而在HL7702/HBx细胞中更加明显(P<0.05)。【结论】:1. HBx蛋白可促进HL7702细胞分裂增殖、促进细胞生长;HBx蛋白可显著升高肝细胞中COX-2的mRNA及蛋白表达水平;HBx蛋白能通过调控COX-2的表达而促进肝细胞增殖,诱导肝细胞恶性转化。2. COX-2选择性抑制剂NS-398能通过降低COX-2的表达,抑制高表达的COX-2的HL7702/HBx细胞的恶性增殖,阻止肝细胞在肝癌早期阶段的癌变转化。
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