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铁皮石斛(Dendrobium officnale Kimura et Migo)为兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium Sw.)植物,主要分布在江西、广西、贵州、云南、河南等地区,是传统的中药材。但由于其对生境条件要求极为苛刻,很难开花及结果,再加上近年来人工过度采挖,致使铁皮石斛野生资源受到极大破坏。因此,探求一条保护铁皮石斛野生资源的有效途径已迫在眉睫。本研究从探究铁皮石斛试管开花的最适培养条件、铁皮石斛种子最佳保存方法、疑似铁皮石斛杂交种及其亲本鉴定三个方面进行研究,为进一步建立铁皮石斛快繁体系、缩短育种周期,延长铁皮石斛种子寿命及鉴别种质提供理论依据。本论文首先以铁皮石斛无根试管苗为试验材料,利用BA、NAA、TDZ、PP333四种激素并结合低温诱导,系统地对铁皮石斛无根试管苗进行单因素处理、多因素正交处理以及低温诱导处理试验,以确定铁皮石斛试管开花的最佳培养条件。结果表明,铁皮石斛的最佳开花培养条件为:1/2MS+NAA 0.2 mg/L+BA 3.0 mg/L+TDZ 0.06 mg/L+PP333 0.4 mg/L,同时附加蔗糖 30.0g/L,马铃薯100.0g/L,琼脂 7.0g/L,并在20℃低温下处理30 d,花芽形成率可达100%,花开放率达80%以上。选取采集的新鲜铁皮石斛种子为试验材料,经过不同时间干燥处理后,获得含水量适宜的种子,然后分别在常温、4℃、-20℃和液氮中保存30d、60d、90d,并在保存后统计种子活力及萌发率,以确定保存种子的最佳方法。同时观察种子在萌发过程中的形态变化,可为铁皮石斛种子萌发选择适宜的培养基提供理论指导。结果表明,种子含水量为20.63%时,种子萌发率可达94.15%。种子含水量为10%-20%时,种子萌发率可达90%以上。经干燥处理24 h后,再在液氮中贮存是保存铁皮石斛种子的最佳方式。选取采自安徽霍山的疑似铁皮石斛杂交种为试验材料,通过nrDNA ITS和cpDNA psbK-psbI序列BLAST比对,并构建UPMGA树,对疑似杂交种及其亲本来源进行鉴定。ITS序列比对结果表明,疑似铁皮石斛杂交种全部个体的第355位点上为细茎石斛和铁皮石斛在同一个位点上碱基的叠加,证明了疑似杂交种是细茎石斛和铁皮石斛的杂交后代。对psbK-psbI间隔区序列分析结果表明,5个杂交种个体,即MO1 M02、M04、M07、M09与铁皮石斛共享同一单倍型;其余5个杂交种个体,即M03、M05、M06、M08、MO10与细茎石斛共享同一单倍型,序列相似率高达100%,根据被子植物叶绿体基因组母系遗传特点,可推测杂交种MO1、M02、M04、M07、M09的母本是铁皮石斛,杂交种M03、M05、M06、M08、MO10的母本是细茎石斛。