研究背景: 光老化是指长期紫外线(UV)照射而导致的暴光部位皮肤过早老化,其特征性改变为皮肤增厚,粗糙,晦暗及粗深皱纹,真皮层出现光化性弹力纤维变性,光老化的主要病理改变在真皮层。无论从临床表现,组织病理改变还是发生机制,光老化都是完全不同于皮肤自然衰老的一个病程,是可以防治的。考虑到氧自由基在光老化发生发展中的重要作用,寻找稳定的抗氧化剂增强皮肤的抗氧化防御体系,一直是防治光老化的一条重要思路。氮氧化物是一类新的抗氧化剂并已显示出对UV损伤的一些保护作用,因此,引入氮氧化物保护皮肤免遭UV的各种氧化性损伤,包括皮肤光老化将有一定的应用前景。 目的: 1.了解UV照射对真皮结构和代谢的影响,包括对真皮成纤维细胞结构和增殖的影响,氧化损伤作用,对Ⅰ,Ⅲ型胶原纤维及弹力纤维结构和表达的影响以及对基质金属蛋白酶(MMP)-1,MMP-3表达的影响。 2.探讨氮氧化物Tempol对UV引起的真皮结构和各种代谢改变的保护作用,摸索出合适的作用浓度。 方法: 分为体外细胞试验和动物试验两部分。 第一部分以体外培养的人真皮成纤维细胞为研究对象,同时研究长波紫外线(UVA1,340-400nm)和中波紫外线(UVB,280-320nm)照射对细胞各种功能的影响,以MTT法测定细胞增殖率,以流式细胞仪检测细胞周期,以生化方法测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量,以半定量逆转录。聚合酶链反应及酶连免疫吸附试验测定MMP-1,MMP-3,Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白mRNA或蛋白表达水平。细胞接受一定剂量UVA1或UVB照射同时不加或加入不同浓度的Tempol(0.03,0.5,8mM),探讨Tempol对上述各项指标的影响并摸索出合适的作用浓度。 第二部分首先以模拟日光光源(SSR)摸索建立豚鼠皮肤的光老化模型,以苏木素-伊红染色和电镜观察了解豚鼠光老化皮肤真皮结构的变化,以生化方法