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拟除虫菊酯是从天然除虫菊素经历两代发展而成的一类高效、广谱性杀虫剂;由于其大量使用给生态环境和人类健康带来危害而亟待治理;微生物降解是目前比较有效降解拟除虫菊酯的途径。近些年来国内外关于拟除虫菊酯降解的研究大多集中在降解微生物的筛选、降解特性和降解途径的研究等方面;关于降解酶基因的克隆、表达、分子改造和降解机理的研究还不够深入。本研究以实验室保存的一株具有拟除虫菊酯降解能力的铜绿假单胞菌PseudomonasaeruginosaGF31为研究对象,根据前期纯化获得的氯氰菊酯降解酶的氨基酸序列,通过NCBI数据库搜索同源序列,确定以同源性最高的PAO1假定的氨肽酶序列为模板设计引物,从GF31中克隆氯氰菊酯降解酶基因,命名为APs。通过SMART数据库分析APs基因编码的氨基酸序列,按照该蛋白的不同结构片段进行克隆,分别是ORF(全长基因)、SgI(去信号肽和前导肽的成熟蛋白)、PA(保留Pfam及Peptidase结构域)、Pep(Peptidase),基因片段大小分别为:1611bp、1503bp、1014bp和645bp。通过与载体pET28a/pET30a/pET32a构建表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)、Rosseta(DE3)、Rosseta-gami成功构建了基因工程菌。对构建的工程菌表达氯氰菊酯降解酶的情况进行了探索,发现该酶在BL21(DE3)、Rosseta(DE3)中以包涵体形式表达,在Rosseta-gami中以可溶形式融合表达;通过镍柱亲和层析对氯氰菊酯降解酶进行了纯化和酶活测定,结果显示SgI片段编码的蛋白24h对氯氰菊酯的降解率为12.7%。该酶为蛋白酶其中的氨肽酶,经过测定,对底物L-亮氨酸-对硝基苯胺(Leu-pNA)的比活力为1255.2U/mg。为了研究目的基因的表达水平,制备了目的基因APs和内参基因16SrRNA的质粒标准品,按10倍梯度稀释测定并绘制标准曲线,得到的标准曲线R~2>0.99,扩增效率=90-110%,成功建立了相对实时荧光定量PCR方法,可用来检测铜绿假单胞菌氯氰菊酯降解酶基因的表达水平。初步以此方法测定了工程菌相比于野生菌GF31中氯氰菊酯降解酶基因的表达水平变化。