MMP-8及MMP-9对角膜混浊度的影响

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目的探讨MMP-8、MMP-9对角膜混浊度的影响;比较MMP-8及MMP-9对角膜基质胶原的破坏作用。方法选取角膜正常的C57BL/6J小鼠8只,共16只角膜,经腹腔麻醉后脱颈椎法处死,2 mm角膜环钻取中央角膜,用于体外实验。将角膜随机分4组,MMP-8组、MMP-9组为实验组,Assay Buffer组为阴性对照组,生理盐水组为空白对照组,分别加入到含100μL的20 ng/μL MMP-8、20 ng/μL MMP-9、Assay Buffer、生理盐水的96孔板中,36.5℃孵育24 h后取出,测定各个角膜的羟脯氨酸浓度;选取角膜正常的C57BL/6J小鼠30只,共60只角膜,用于体内实验。将小鼠分3组,MMP-8组、MMP-9组为实验组,生理盐水组为对照组,分别给予角膜基质内注射约10μL的20 ng/μL MMP-8、20 ng/μL MMP-9及生理盐水,分别于注射前(0 h)及注射后4、8、12、20、24 h进行混浊度评分、二次谐波扫描角膜基质信号强度,并于8 h、24 h分别经腹腔麻醉后脱颈椎法处死,取角膜进行羟脯氨酸浓度测定。结果体外实验中,实验组角膜羟脯氨酸浓度明显低于阴性对照组(F=451.492,P=0.000)及空白对照组(F=252.403,P=0.000),差异有统计学意义,MMP-8组角膜羟脯氨酸浓度明显低于MMP-9组(F=55.184,P=0.002),差异有统计学意义。体内实验中,0 h实验组与对照组角膜混浊度无明显差异(χ2=0.000,P=1.000)。4、8、12、20、24 h实验组角膜较对照组角膜明显混浊,结果有统计学差异(P<0.05),MMP-8组较MMP-9组角膜混浊度无明显差异(P>0.05)。0 h二次谐波扫描实验组与对照组角膜基质信号强度无明显差异(P>0.05)。4、8、12、20、24 h,实验组角膜基质信号强度均明显低于对照组,结果有统计学差异(P<0.05),MMP-8组与MMP-9组相比较,结果无明显统计学差异(P>0.05)。8 h对小鼠角膜取材进行羟脯氨酸浓度测定,实验组角膜羟脯氨酸浓度明显低于对照组,差异有统计学意义(F=17.877,P<0.001),MMP-8组与MMP-9组相比较,结果无明显统计学差异(P>0.05)。24 h对小鼠角膜取材进行羟脯氨酸浓度测定,实验组角膜羟脯氨酸浓度明显低于对照组,差异有统计学意义(F=41.400,P<0.001),MMP-8组与MMP-9组相比较,结果无明显统计学差异(P>0.05)。MMP-8组SHG角膜基质信号强度与角膜混浊度临床评分之间呈明显负相关(rs=-0.511,P<0.001),MMP-9组SHG角膜基质信号强度与角膜混浊度临床评分之间呈明显负相关(rs=-0.613,P<0.001)。结论MMP-8及MMP-9可降解角膜基质中的胶原纤维,导致角膜基质胶原纤维排列紊乱,角膜混浊度升高;体外实验中,同一质量浓度的MMP-9较MMP-8有更强的降解角膜基质胶原的能力;在体实验中,角膜基质注射条件下,同一质量浓度MMP-9与MMP-8降解胶原的能力无明显差异。
其他文献
目的:通过观察商陆皂苷甲(EsA)对IL-1p诱导的大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖与凋亡及CDK2、P27和Caspase-3表达的影响,探讨EsA治疗狼疮性肾炎(LN)等系膜细胞增殖性肾小球疾病的可能机制。方法:①用MTT法检测不同浓度的EsA (0.625mg/L,1.25mg/L,2.5mg/L,5.0mg/L,10mg/L,20mg/L)对rGMC增殖与毒性的影响,同时设立对照组(不加