目的梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum, TP)引起的一种性传播疾病,其主要通过性行为和血液传播,也可通过胎盘母婴垂直传播。近年来我国的梅毒发病率有逐年上升的趋势。梅毒患者是梅毒的惟一传播源,对梅毒进行早诊断、早治疗是控制其蔓延至关重要的一个环节。梅毒螺旋体可侵犯全身各脏器,造成多器官病变、功能失常、组织破坏,甚至死亡,对人们的健康构成了严重的威胁。由于梅毒螺旋体具有较强的传染性和病程的复杂性,且梅毒在早、中期临床表现不显著,常常造成病人对病情的忽视,给病人身体健康带来极大的危害,也使梅毒的传播更为加快。血清学检测是诊断梅毒的重要实验室检测方法。目前梅毒的血清学检测方法主要有两种：一类是非梅毒螺旋体抗原血清试验,如快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)等,此类试验检测的是心磷脂抗体,为非特异性抗体检测试验,常用作梅毒的筛查试验,亦可用于梅毒的疗效观察、复发及再感染。由于此类实验受多种因素影响,常出现生物学假阴性和假阳性结果,对一、三期梅毒的阳性率不高,因此仅适于二期梅毒的诊断,而不适于诊断一、三期梅毒,包括潜伏梅毒、神经梅毒的诊断。作疗效观察时,常出现血清学固定,使临床医生难以判断治疗终点。另一类是梅毒螺旋体抗原血清实验,如梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)等,这类试验的敏感性高、特异性强,临床常用此类试验作为梅毒的确认试验。但是此类试验检测的是梅毒螺旋体IgG抗体和IgM抗体,而IgG抗体长期存在,血清反应持续存在阳性,不能用作梅毒治疗的疗效观察。因此迫切需要寻求一种敏感性高、特异性强的梅毒早期检测方法,为临床早期诊断、早期治疗及驱梅治疗后的疗效观察提供确切的实验依据。抗梅毒螺旋体IgM抗体是梅毒感染最早产生的抗体,患者一般感染后两周即可从血清中测出,因此是梅毒早期感染并活动的标志。经有效治疗后IgM抗体消失,晚期潜伏梅毒患者出现IgM抗体阳性,需要考虑是否再感染或体内未清除病灶再燃的情况。此外,TP-IgM抗体对诊断先天性梅毒和神经梅毒具有重要意义.由于IgM抗体的分子量较大,不能透过胎盘屏障和血脑屏障等天然屏障,如若在新生儿血液中或成人脑脊液中检测到TP-IgM抗体,则可诊断先天性梅毒或神经性梅毒。目前认为TP-IgM抗体测定可用于：①梅毒的早期诊断；②梅毒治疗后的疗效观察；③梅毒复发或再感染的判断；④新生儿胎传梅毒的诊断；⑤神经梅毒的诊断。本研究旨在探讨各期梅毒患者血清抗梅毒螺旋体IgM抗体的检测情况和临床意义,并评价捕获法ELISA检测TP-IgM抗体对各期梅毒治疗后的随访意义。随着分子生物学、免疫学和基因工程技术的迅速发展,随着基因工程技术制备梅毒螺旋体特异蛋白抗原的成功,TP-IgM抗体检测已经逐渐应用于实验室诊断中。但是目前各实验室对捕获法ELISA检测TP-IgM抗体检测方法应用于临床的评估较少,并且我国学者对TP-IgM抗体在疗效观察方面的研究开展的也较少。本实验通过大量的临床样本验证了捕获法ELISA检测对早期梅毒的诊断具有较高的灵敏度和特异性,在疗效观察方面优于RPR,是一种良好的早期梅毒诊断和疗效观察的实验室指标,为我国日趋严峻的梅毒防治工作的改善奠定理论和实验基础。材料与方法一、实验材料本实验所有标本均来自沈阳市第六人民医院性病门诊患者血清；快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)试剂盒购自上海荣盛生物技术有限公司；梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)试剂盒购自日本富士株式会社;梅毒螺旋体IgM抗体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)试剂盒由北京热景生物有限公司提供；高速离心机(Sigma, USA);酶标仪(BIO-RAD Model 680);洗板机(BIO-RAD Model 1575 Immun Wash);电热恒温培养箱(DRP-9082,上海森信实验仪器有限公司公司)；微样加样器(Eppendor, German)。二、实验方法1、收集患者血清样本。2、采用快速血浆反应素试验(RPR)和梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)检测初诊未治疗患者血清,进行筛查和确认。3、采用捕获法ELISA检测初诊梅毒患者梅毒螺旋体IgM抗体,并与TPPA相比较。4、对TP-IgM阳性患者,于正规驱梅治疗1个月、3个月、6个月、12个月后分别采用RPR及捕获法ELISA跟踪监测,进行疗效评估,分析两种方法的优缺点。结果1、TP-IgM检测阳性率在二期梅毒组中最高,可达100%；其次是一期梅毒,阳性率为70.8%,结果经卡方检验,差异无统计学意义。两期合并的阳性率为90.4%。在潜伏期梅毒捕获法ELISA检测TP-IgM抗体的阳性率仅为23.3%,显著低于早期梅毒(χ~=12.42,P<0.05)。10例类风湿因子阳性患者血清无1例发现阳性。2、一期梅毒和二期梅毒中,捕获法ELISA和TPPA法,差异无统计学意义(P>0.05)。在潜伏期梅毒TPPA、捕获法ELISA的敏感性分别是98.8%、30.2%,捕获法ELISA检测的敏感性明显低于TPPA的敏感性,差异有显著性(χ2=120.56,P<0.05)。3、经规范驱梅治疗后,一期梅毒、二期梅毒、潜伏期梅毒的捕获法ELISA在12个月后的阴转率分别为100%、91.6%、50%。而RPR的阴转率分别为92.8%、83.3%、46.1%。在随访过程中发现,捕获法ELISA的转阴要早于RPR法,并且不会出现血清学固定。总之,捕获法ELISA检测TP-IgM抗体敏感性高、特异性好,是早期梅毒检测较为理想的检测指标。在用于梅毒的疗效观察时,转阴时间早于RPR,也不会出现血清学固定,对治疗终点的判断可靠,在一定程度上要优于RPR。结论1、用捕获法ELISA检测梅毒螺旋体IgM抗体,灵敏度高、特异性好、操作简单,可作为早期梅毒检测较为理想的检测指标。2、该检测方法用于驱梅治疗后的疗效观察,转阴早于RPR,且不会出现血清学固定,对治疗终点的判断准确可靠,是一种良好的梅毒疗效监测的实验室指标。