小鼠成熟精子中mRNA表达谱的分析及mRNA在早期胚胎发育中潜在功能的研究

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为了全面研究小鼠成熟精子中mRNA的表达谱和它们在早期胚胎早期发育中潜在功能,我们采用RNA测序技术对小鼠精子的全部转录本进行测序,并用Real-Time PCR验证RNA测序数据与真实情况的一致性。然后建立数学模型确定精子中普遍存在的RNA种类,并用生物信息学方法分析精子中的mRNA表达谱。最后利用反转录PCR,蛋白印迹和免疫荧光验证精子来源的mRNA是否被带入受精卵中并表达。RNA测序一共得到35288825个读段,定位到33039种RNA的参考序列上,其中包括27310种mRNA。基于模型,我们推测RPKM(Reads Per Kilobase of exon model per Million mapped reads)大于6的RNA可能在小鼠每个精子细胞中稳定存在,并估算出精子中有4885种稳定存在的mRNA。当我们提高RPKM的筛选基线时,发现精子中高表达的RNA更可能与生殖发育相关,进一步证明精子中的mRNA是有选择性保留的。分子生物学实验发现精子来源的Wnt4和Foxg1转录本在受精过程中被运送到受精卵中,Wnt4的mRNA在受精卵中被翻译成蛋白,而Foxg1的mRNA虽未被翻译却稳定存在于受精卵中。总之,我们发现大约有4885种mRNA可能在每个小鼠的成熟精子中存在,与生殖和发育相关的mRNA更可能被保留在精子内,精子来源的Wnt4被运送到受精卵子中并被翻译,这可能对胚胎早期发育有着非常重要的作用,也为父系基因效应提供了依据。
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