茶树(Melaleuca alternifolia)油抗菌活性评价及其水乳剂的制备

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由于气候、环境和生产方式的改变,植物病害的发生越来越严重。化学杀菌剂在防治植物病害方而仍发挥着重要作用,但长期大量的使用化学杀菌剂,容易造成农药残留、环境污染、病原菌抗药性以及危害人们身体健康等问题。因此,迫切需求开发安全、高效的植物杀菌剂,替代化学杀菌剂使用。本文以重要植物病原菌为靶标,采用生长速率法,评价了福建、南宁、贵州、吉安等4地茶树油(TTO)抑菌活性的差异;研制出了茶树油杀菌水乳剂,并在苣莴、西葫芦、油菜植物上进行了大田试验。主要研究结果如下:1.以稻瘟菌(Pyricularia grisea Sacc)、辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)、小麦赤霉菌(Gibberella sanbinetti)、苹果炭疽菌(Gleosporium fructigenum Berk)、梨黑星菌(Venturia nashicola)、番茄枯萎菌(Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici)、番茄灰霉菌(Botrytis cinerea)、茄褐纹菌(Phomopsis vexans(Sacc.et Syd.)Harter)和苹果树腐烂菌(Cytospora mandshurica Miura)等9种植物病原菌为靶标,采用生长速率法,评价了茶树油的室内离体抑菌活性,结果表明,吉安茶树油对番茄枯萎菌、稻瘟菌、苹果腐烂菌、梨黑星菌、小麦赤霉菌、番茄灰霉菌、茄褐纹菌、辣椒疫霉菌、苹果炭疽菌等9种病原菌的EC50值分别为118.61mg·L-1,207.58mg·L-1,215.81mg·L-1,279.88mg·L-1,405.98mg-L-1,422.46mg·L-1,446.57mg·L-1,468.20mg·L-1,829.56mg·L-1;福建茶树油的EC50值分别为349.67mg·L-1,450.91mg·L-1,1189.85mg-L-1,316.29mg·L-1,389.86mg-L-1,404.03mg·L-1,1140.65mg·L-1,441.37mg·L-1,335.51mg·L-1;南宁茶树油的EC50值分别259.81mg-L-1,217.35mg·L-1,2469.50mg-L-1,543.98mg-L-1,528.19mg·L-1,475.01mg-L-1,1814.65mg·L-1,539.78mg·L-1,600.95mg-L-1;贵州茶树油的EC50值为273.47mg·L-1,502.33mg·L-1,232.04mg·L-1,454.51mg·L-1,433.05mg-L-1,436.14mg·L-1,831.42mg-L-1,540.66mg·L-1,721.47mg·L-1;可见茶树油对9种植物病菌都有一定的抑菌效果,4个产地茶树油对番茄枯萎病小麦赤霉病、番茄灰霉菌、稻瘟病菌效果较好。2.利用生长速率法以及熏蒸法测定了茶树油主要成分4-松油醇(Terpinen-4-ol)、γ-松油烯(y-Terpinene)、a-松油烯(a-Terpineol)、1,8-桉叶素(1,8-Cineole)对苹果腐烂菌、梨黑星菌、番茄灰霉菌、茄褐纹菌、辣椒疫霉菌等5种植物病菌的抑菌活性。结果表明,对植物病菌EC50分别为124.91mg-L-1、151.13mg-L-1、218.23mg-L-1、269.91mg·L-1、296.60mg-L-1。其中a-松油烯表现出较强抑菌活性;γ-松油烯(y-Terpinene)、1,8-桉叶素(1,8-Cineole)对植物病菌无抑制效果。熏蒸测定结果为,y-Terpinene,1,8-Cineole熏蒸对四种植物病源菌没有抑制效果。a-Terpineol熏蒸效果,随着熏蒸时间的不断增加,抑制率逐渐降低,在0.5h时抑制率都在80%以上,且在培养24h、48h、72h内均表现出较强的抑制效果。3.利用气相色谱检测了吉安、福建、南宁、贵州4地茶树油主要成分的含量。结果表明,Terpinen-4-ol的含量分别为4.60%,33.05%,29.25%,31.50%;a-Terpineol的含量分别为21.23%,4.54%,5.16%,5.45%;γ-Terpinene的含量分别为4.99%,15.84%,14.85%,16.74%;1,8-Cineole的含量分别为14.16%,5.43%,5.84%,6.22%。福建、南宁、贵州产地茶树油主要成分有一定差异,但与吉安产地的茶树油主要成分差异较大。这种差异可能是引种的互叶白千层小种,在不同生长环境发生了变异或是加工方法不同造成差异。4.以茶树油为主要成分,通过筛选乳化剂、分散剂、抗冻剂等助剂,得到茶树油EW制剂的配方:茶树油40%,乳化剂用量5%,其它助剂量为3%,用蒸馏水补足至100%。分别测定了40%茶树油EW的热贮稳定性、冷贮稳定性、冻熔稳定性以及稀释稳定性,未出现分层、析油、沉淀、析水等现象,水乳制剂中茶树油主要成分热贮分解率为8.13%,小于10%,符合农药水乳剂产品标准规定的质量性能标准。5.采用茶树油熏蒸和水乳剂浸泡处理,在室内评价了其对番茄灰霉病活体控制效果。结果表明,茶树油薰蒸处理,对番茄灰霉病菌表现出一般的抑菌活性,第3天抑制在20%-40%之间,高浓度茶树油薰蒸的抑菌效果比低浓度的抑制效果好。茶树油水乳剂浸泡处理,其抑菌效果较薰蒸的强,第4天抑制率在15%-50%之间,高浓度浸泡抑菌效果相对比低浓度的抑制效果较好。6.田间药效试验结果表明,对于莴苣灰霉病,20%茶树油EW稀释125倍施用后7、14天的防治效果分别为25%、0.3%;40%茶树油EW稀释200倍,施用后7、14天的防治效果分别为70.50%、29.9%;42.5%茶树油·异菌脲EW稀释200倍,施用后7、14天的防治效果分别为46.10%、5.3%;和42.5%茶树油·戊唑醇EW稀释200倍,施用后7、14天的防治效果分别为47.60%、52.8%;对照药剂50%异菌脲SC稀释500倍,施用后7、14天的防治效果分别为16.70%、7.2%;施药量随着稀释倍数的增大,防效逐渐降低。茶树油EW施药后7天的防效都超过了对照药剂的50%异菌脲SC防效。14天40%茶树油EW、40%茶树油EW防效超过对照药剂防效。茶树油莴苣灰霉病的有一定防治效果,与化学农药戊唑醇复配取得了较好的效果。对于西葫芦灰霉病40%茶树油EW稀释100倍、200倍、300倍,施用后7,14天的防治效果分别为21.73%、23.90%、23.57%,27.90%、26.07%、10%;42.5%茶树油·异菌脲EW稀释100倍、200倍、300倍,施用后7,14天的防治效果分别为60.67%、50.08%、44.13%,49.57%、16.57%、26.40%;对照药剂50%异菌脲SC稀释500倍,施用后7、14天的防治效果分别为64.8%、20.67%;由方差分析得,在0.05的水平下,40%茶树油EW在不同稀释倍数时,防效差异性不显著;42.5%茶树油·异菌脲EW在不同稀释倍数时,防效差异性显著;对于油菜菌核病40%茶树油EW稀释100倍、200倍、300倍,施用后7,14天的防治效果分别为76.67%、70.10%、66.00%,74.57%、57.17%、44.97%:42.5%茶树油·异菌脲EW稀释100倍、200倍、300倍,施用后7,14天的防治效果分别为71.57%、61.10%、47.03%,62.10%、39.40%、26.03%;对照药剂50%异菌脲SC稀释500倍,施用后7、14天的防治效果分别为31.47%、25.70%;由方差分析得,在0.05的水平下,40%茶树油EW在不同稀释倍数时,防效差异性显著水平;42.5%茶树油·异菌脲EW在不同稀释倍数时,防效差异性显著水平;从试验数据可得,茶树油EW防效比化学农药异菌脲防治效果好。鉴于测定结果表明茶树油对植物病害均有一定的防治作用。茶树油是天然植物油对一些突发性流行病害和发病严重病害控制效果不及化学药剂的效果。因此开发茶树油与化学杀菌剂的混用制剂将具有较大的应用价值。
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