新疆野生巴尔喀什蘑菇驯化栽培与漆酶活性研究

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:gbyljk008
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新疆特殊的地貌和植被孕育了一些特有的大型沙生真菌。我们收集和鉴定出了 19种食药用菌,其中巴尔喀什蘑菇是一种个体硕大,品质优良,深受当地各族人民喜爱的食用菌。以采自博湖县野生巴尔喀什蘑菇Agaricus balchaschensis子实体上分离纯化的菌株BCBH为材料,进行了菌丝体生物学特性测定、培养条件优化和胞外漆酶活性响应面优化,以及利用离子交换层析和凝胶过滤层析等技术,纯化得到了野生巴尔喀什蘑菇子实体漆酶。分子生物学系统分类研究证明,巴尔喀什蘑BCBH菌株与美味蘑菇和Adesjardinii在同一节点上聚在一类,介于双孢蘑菇与大肥菇之间,距离在0.005以下。长时间低温处理对巴尔喀什蘑菇菌丝生长有抑制作用。3.12 mM浓度的NaCl溶液对菌丝生长有促进作用;菌丝适宜的pH为中性至略酸性;麦芽糖和可溶淀粉培养基适于巴尔喀什蘑菇菌丝的生长;巴尔喀什蘑菇可利用硝酸铵和蛋白胨提供氮源;响应面分析可知NaCl、麦芽糖和硝酸铵两两所形成的等高线为椭圆形或马鞍形,生物量最大方案为NaCl 0.2 g/L、麦芽糖6.0 g/L和硝酸铵1.5 g/L,巴尔喀什蘑菇菌丝体生物量预测值是2.108 g/L;实际得到2.09 g/L,两者相差0.85%。驯化栽培中采用熟料栽培模式,培养料是麦秆、玉米秆、芦苇秆加麸皮和预先发酵好的商品料加麦粒等,其中商品发酵料加麦粒装袋灭菌培养料可以正常产出子实体。棉籽壳为主料的培养料菌丝不能生长。以胞外漆酶活性为响应值,通过单因素分析和Box-Behnken的响应面模拟,得到的回归方程为:Y =-17.56408 + 2.03860X1-0.29335X2 + 0.18440X3 + 0.083583X1X2-1.00000E-004 X1X3 + 9.71111E-003 X2X3-0.13368X1X1-0.12210X2X2-9.05528E-004X3X3。即三个主要因素的最佳水平值分别为:蔗糖10g/L,酵母粉7g/L以及摇床转速150 r/min。其相对应的响应值为4.653 U/mL。以野生巴尔喀什蘑菇子实体为材料,采用CM-cellulose阳离子交换柱层析、Q-Sepharose阴离子交换柱层析和Superdex75凝胶过滤层析,获得纯化的漆酶。分子量为66 kDa,N端9个氨基酸的序列是AVIIITVNM。最适pH和最适温度分别是2.2和40℃,在4-50℃保持稳定。Hg2+离子对该漆酶活性的抑制作用最大。巴尔喀什蘑菇子实体漆酶对铬黑T染料降解效果最好,24hr时的脱色率达到47.77%;对孔雀绿具有部分解毒作用。
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