盐离子对Hela细胞“30nm”染色质提取纯化的影响及“30nm”纤维结构初探

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染色质“30nm”纤维是遗传信息发挥作用的重要处所,其结构受到了广泛的关注,自其概念提出至今已有30多年。在此期间,研究人员基于不同的实验材料和方法给出了染色质纤维不同的结构模型并引起了该领域的热议。本实验选择Hela细胞作为实验材料,以前人的实验方法作为基础,综合考虑Hela细胞自身的特点,对实验方法作出了改良和创新,使整个实验方案更加适用于本课题的研究。本实验从细胞内进行染色质“30”nm纤维的提取纯化及电镜观察,力求对争议的热点进行初步的实验分析。根据研究内容制定了实验思路:首先,利用最接近细胞内环境的缓冲液进行染色质纤维结构的细胞内提取及纯化,然后进行醋酸铀负染、钨丝喷金属及快速冷冻等制样方法制备电镜样品并进行电镜观察,最后综合生化实验结果及电镜照片进行实验分析。通过实验,得到了以下初步的研究结论:1,含有1.5mM MgCl2,1mM CaCl2,75mM NaCl的细胞核裂解液有效地抑制了He]a细胞内源性核酸酶对染色质结构的酶切;2,Hela细胞染色质纤维结构形态受到盐离子的影响,表现出在OmM Na+到100mM Na+之间随着盐浓度的升高,染色质结构逐渐折叠紧密的趋势。3, Hela细胞长短染色质纤维结构存在结构模型上的差异,表现为短片段染色质结构更接近one-start模型,长片段染色质结构更接近two-start模型;4,通过冷冻电镜观察,Hela细胞长染色质纤维结构表现出一定的two-start结构模型的特点。
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