聚偏氟乙烯改性亲和膜及其吸附与免疫分离性能研究

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xhcbwrs
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
亲和膜分离技术是将亲和色谱和膜分离相结合的一种新型分离技术,既具膜的快速对流传质特征,又有生物分子的识别功能,能实现一步纯化获得高纯度生物物质的目的,从而简化纯化步骤,可减少产品损失,降低操作成本。聚偏氟乙烯(PVDF)耐高温、耐溶剂,并具有优良的化学稳定性,如能制得性能优良的中空纤维亲和膜,则将对亲和膜分离的工业放大与推广应用起到重要作用。 本论文首次利用PVDF中空纤维膜为基质材料,通过表面涂覆、接枝、共混等改性方法,有效地改善了PVDF膜表面的亲水性和生物相容性,并将特定的配基接枝到改性PVDF膜表面,制备成亲和膜,用于生化产品的分离纯化。具体内容如下: (1)将亲水性物质羟乙基纤维素(HEC)偶联到经强碱改性的PVDF中空纤维膜上,进一步分别接枝上L-苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)和组氨酸(His),制得氨基酸亲和膜。用FT-IR和XPS分析其接枝效果,配基密度分别达到780.3、611.5、702.1μmol/g膜;将其用于从人血浆中分离纯化出有医用价值的丫-球蛋白,最适条件下,10m1人血浆可纯化出21mg γ-球蛋白,其纯度达83.9%,纯化倍数达6倍以上;经7次重复性使用,Phe亲和膜的吸附量仍没有明显降低,为人血浆中γ-球蛋白的分离纯化提供了一条简便、实用的新方法。 (2)PVDF中空纤维膜经强碱处理后,将亲水性物质聚乙烯醇(PVA)偶联到PVDF膜上,经戊二醛交联并键合壳聚糖,制得壳聚糖亲和膜。用FT-IR和XPS分析其膜表面改性效果;壳聚糖键合量达到0.154mg/cm2膜;将壳聚糖亲和膜用于水溶液中内毒素的去除,在pH7.0,离子强度0.2mol/1条件下,其饱和吸附量为21.421EU/mg膜,解离常数为0.500lEU/mi,流速为1ml/min时,内毒素去除率达到92.3%,去除效果良好;用于去除牛血清白蛋白BSA和溶菌酶溶液中内毒素时,在最适pH、离子强度条件下,其对内毒素去除率分别为88.6%(11.50 EU/mg膜)和72.4%(9.92 EU/mg膜),蛋白质回收率分别可达93.4%(0.187 mg/mg膜)和92.3%(0.104 mg/mg膜)。 (3)采用干法制膜制得了网络状大孔结构的硝酸纤维素(NC)和PVDF微孔膜。对于NC膜,以丙酮为溶剂,乙醇、异丙醇和水为非溶剂添加剂,通过调节制膜液中溶剂和非溶剂的配比以及成膜环境条件,首次制备了孔径可控的NC膜,为制备网络状孔径结构均一的大孔膜的发展提供了一种新方法;对于PVDF膜,则分别采用磷酸三乙酯(TEP)、二甲基甲酰胺(DMF)和二甲基乙酰胺(DMAc)为溶剂,乙醇、异丁醇、丙酮、醋酸甲酯和水为非溶剂添加剂,由于PVDF的高度结晶性,所制得的PVDF膜其孔径的变化幅度没有NC膜那样宽。 (4)采用聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)作增容剂(Compatibilizer),可有效促进PVDF和NC之间的共混相容性;通过调节制膜液中聚合物和溶剂配比、非溶剂添加剂种类以及成膜环境,制备出网络状结构的PVDF/NC共混膜。静态水接触角分析发现,随着制膜液中NC含量的增大,共混膜的亲水性逐渐得到提高。 (5)通过Western转印技术,将纯度为98%的重组别藻蓝蛋白(recombinant allophycocyanin,rAPC)分别转印到研制的NC、PVDF和PVDF/NC共混膜上,制备成rAPC免疫亲和膜,利用抗体与抗原之间的特异性免疫反应,分别对兔抗APC多克隆抗血清进行分离纯化,获得的兔抗APC抗体的纯化吸附量分别为5.79、7.54和7.32 mg/g膜;经SDS-PAGE分析,其抗体纯度均高于98%,为抗体的亲和纯化提供了一种高效的免疫分离用膜。
其他文献
<正>截至2009年,国外定量投资在全部投资产品中的份额占30%以上,主动投资产品中有20%~30%使用量化技术,量化投资成为全球基金主流投资方法之一。国外量化共有基金在过去数十年
锑(Antimony)是一种剧毒的类金属,锑中毒会导致人体心肌衰竭、肝坏死等疾病。自然界中有些微生物能够通过氧化毒性强的Sb(Ⅲ)至毒性弱的Sb(Ⅴ)来解毒。本课题组前期发现在锑氧
紫肉甘薯块根内外均为紫色,其花青素含量高。花青素除了具有感官调色作用,其抗氧化、延缓衰老、降低血糖和抗肿瘤等生理保健和药用功能也越来越被人们重视。目前对于植物地上组织开花结果的着色和花色苷合成代谢相关研究较多,但是对于植物地下组织大量积累花色苷的合成调控研究报告很少。本研究通过对不同移栽时期、遮光处理的紫肉甘薯进行生理和花色苷合成途径相关酶的蛋白表达水平分析,以期为紫肉甘薯花色苷的合成与积累调节提