荧光相关光谱单分子检测系统研究及应用

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  单分子研究是人们长期以来的梦想,也是近十多年来的研究热点。由于在单分子检测中背景的影响非常严重,近年来的研究重点都集中在如何获得高信背比的单分子信号上。   本文基于激光共焦构型,构建了一套高灵敏度、高稳定性的荧光相关光谱(FluorescenceCorrelationSpectroscopy,FCS)单分子检测系统。该系统采用激光激发,用高数值孔径物镜使激光束聚焦,并用同一物镜收集样品的荧光,单光子计数器用于实时记录荧光信号,该荧光信号用相关器实时相关。整个系统保持物镜焦点、针孔以及单光子计数器光敏区同轴。该自组装系统在光学收集方面采用了独特的设计,使光学收集效率得到更好的提高。对单个RhodamineGreen分子,其信噪比超过300,完全能够实现单个分子的检测。   用建立的荧光相关光谱装置对荧光纳米量子点的一些特性,如流体动力学直径、单分子亮度以及分子量进行了研究,结果表明,荧光相关光谱方法简单、快速,需要样品量少,是一种新的、可靠的荧光量子点表征方法。对自合成量子点的研究表明,量子点经包壳后(即形成核/壳结构),其表面化学稳定性显著增加。但单分子亮度有所下降。   该装置还用于错配修复蛋白-错配DNA相互作用研究、核酸分子杂交-点突变研究以及与微流控芯片的联用中,这些工作表明,荧光相关光谱在生物单分子检测研究中可发挥重要作用。
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