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树突状细胞(dendritic cells,DC)是已知的机体内功能最强的抗原递呈细胞(antigen-presenting cells,APC),也是目前发现的唯一的能直接激活初始型T细胞的APC能够诱导患者机体产生肿瘤特异性、持久的主动免疫应答,在肿瘤细胞和T淋巴细胞之间起到连接和枢纽的作用。但负载肿瘤细胞抗原刺激DC成熟的最佳方式及剂量尚未确定。
目的:
用凋亡(5umol/L洛铂所致)以及(热休克、反复冻融和20umol/L所致)坏死的肺腺癌A549细胞抗原作为肿瘤相关抗原(tumor associated antigen,TAA),负载小鼠骨髓来源的DC(bone marrow-derived dendrtic cell,BM-DC),分别获得A-DC、H-DC、L-DC、N-DC,通过比较其表型、结构和白介素(interleukin,IL)-12p70分泌量的影响,来评估二者对诱导BM-DC成熟能力的影响。
材料与方法:
体外诱导DC,并用不同实验条件下所得的TAA负载于DC;流式细胞术测定DC表面标志CD40、CD86、MHC-Ⅱ类分子,相差显微镜下观察DC形态,ELISA法测定IL-12p70分泌量,流式凋亡试剂盒检测A549细胞凋亡。
结果:
(1)随洛铂浓度增加,A549细胞的存活率降低,凋亡率增加。洛铂浓度为5μmol/L时, A549细胞存活率为(80.51±3.23)%,凋亡率为(9.83±0.79)%;洛铂浓度为40μmol/L时,A549细胞存活率为(43.72±1.77)%,凋亡率为(31.37±1.19)%;(2)相差显微镜下可见成熟的DC(mature DC,mDC)较不成熟的DC(immature DC,iDC),表面突起较之多,呈毛刺或树枝状;(3)不同实验条件(DC、L-DC、H-DC、N-DC和A-DC)刺激下DC的表面标志MHC-Ⅱ类分子分别为(46.74±2.37)%、(27.54±2.26)%、(52.00±2.27)%、(58.41±1.85)%,(81.81±3.81)%;CD86分别为(47.17±3.02)%、(7.50±1.04)%、(47.15±2.14)%、(55.69±3.03)%、(64.35±2.51)%;CD40分别为(56.79±3.51)%、(17.42±1.89)%、(67.36±2.43)%、(72.09±2.66)%、(82.98±2.98)%。A-DC的表面标志MHC-Ⅱ类分子显著高于H-DC和N-DC的表达(P<0.01);A-DC与N-DC表面均高表达CD86、CD40,二者间有统计学差异(P<0.05)。(4) DC和L-DC分泌IL-12的能力较弱,其细胞上清浓度分别为(315.30±18.73)、(252.16±20.11)pg.ml-1; H-DC、N-DC和A-DC分泌IL-12的能力增强,其细胞上清浓度分别为(405.34±36.87)、(468.75±34.02)和(764.33±55.01)pg.m1-1。N-DC和A-DC的IL-12分泌量均明显增加,与对照组间有统计学差异(P<0.05),其中尤以A-DC的IL-12分泌量最高,与N-DC间差异显著(P<0.01)。
结论:
1、洛铂抑制A549细胞生长,低剂量洛铂可致A549细胞凋亡;
2、洛铂所致凋亡的A549细胞抗原可刺激树突状细胞成熟。