本实验从新西兰兔肌肉中分离出MDSC加以鉴定，并将其诱导为平滑肌细胞，研究其表形特征及探索其分化特性。 研究材料与方法： 1.实验动物：新西兰大白兔，雌雄不限，体重约1.5～2.0Kg，月龄1～1.5个月。 2.实验试剂与器材：小鼠抗α平滑肌肌动蛋白抗体(α-SMactin，α-SMA)、小鼠抗desmin、小鼠抗skeletalmyosin(fast)、小鼠抗vimentin、FITC-羊抗小鼠IgG、Cy3-羊抗小鼠IgG、ⅩⅠ型胶原酶；马血清(HS)、DMEM-LG、Trypsin；dispase；胎牛血清；兔抗GAPDH；BCA-100蛋白定量测定试剂盒；二抗曝光试剂盒。流式细胞仪、超净台、显微外科器械等。 3.MDSC的分离、培养、鉴定及其融合特性检测：利用Preplate技术分离MDSC：无菌条件下取得新西兰兔的臀肌并剪成肉泥，依次使用Ⅺ型胶原酶、dispase及胰酶对组织进行消化，得到的细胞悬液接种入培养瓶，此为PP1；细胞培养箱中孵育2小时后将PP1中的悬液转移至经胶原包被的培养瓶，此为PP2；随后每24小时将悬液转移至胶原包被的培养瓶，此为PP3～PP6。PP6中相当大部分即为MDSC。收集PP6细胞，利用流式细胞仪(FCM)检测其desmin、CD45及Bcl-2阳性细胞的百分数；利用免疫细胞化学检测desmin表达；利用WesternBlotting检测PP1～PP6中α-SMA的表达趋势。在高汇合度或低血清浓度培养基的条件下检测MDSC的融合倾向。 4.MDSC体外诱导分化为平滑肌细胞的实验研究：诱导分化采用共培养诱导体系和直接诱导体系。 (1)共培养诱导：细胞用Hoechst33342进行细胞核的标记，接种至六孔板，每孔内加入等量的兔海绵体平滑肌细胞(CSMC)进行共培养，2天后进行免疫细胞化学检测α-SMA表达情况。同时设置未处理组以及阳性对照组。 (2)直接诱导：细胞接种到六孔板后添加含25ng/ml血管内皮生长因子(VEGF)的培养基培养，2天后进行免疫细胞化学以及WB法检测α-SMA表达情况。同时另设一未处理组，阴性对照组以及阳性对照组。 实验结果：Preplate技术分离的细胞中PP1和PP2贴壁细胞相对较少，PP3开始即有大量的短梭形、圆形或多角形细胞贴壁，这些小体积细胞数量到PP6时增至80％。它们极易融合，生长呈方向性。流式细胞仪检测结果显示PP6细胞的desmin、CD45以及Bcl-2的阳性率平均为83.10±0.16％、0.79±0.03％及79.90±0.20％。免疫细胞化学检测可见较多的desmin阳性细胞。WesternBlotting显示PP6不表达α-SMA。融合实验发现PP6细胞在高汇合度或低浓度血清的条件下培养时会很快融合成细胞链，而低汇合度或高血清培养基培养的细胞则不会出现这种情况。 共培养诱导组及直接诱导组在处理2天后，利用免疫细胞化学以及WesternBlotting等检测均见平滑肌细胞特异型抗原α-SMA的表达。 研究结论：利用Preplate技术能有效地分离出MDSC，在体外诱导能分化成平滑肌细胞。