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PML-NBs (Promyelocytic Leukemia Protein Nuclear Bodies,早幼粒细胞白血病蛋白核体)是哺乳动物细胞核中的一种亚结构,又称核域-10 (Nuclear Domain,ND-10),Kremer核和PML致瘤域(PML Oncogene Domains,PODs) (Melnick A and Licht J D 1999)。近十年来的研究发现,PML核体在几乎所有的生物功能包括:转录调节、DNA损伤修复、细胞凋亡、细胞衰老、心血管生成调节中都扮演着重要的角色。在PML核体的形成及降解过程中,许多与其共定位的蛋白发挥重要作用,其中SUMO (Small Ubiquitin-like Modifier)蛋白发挥重要作用。SUMO是近年来发现的在结构上类似于泛素的一类小分子蛋白质修饰物,保守地存在于所有的真核生物中,在蛋白定位、染色质结构的维持、转录调节、DNA损伤修复、核质运输、信号转导等方面发挥作用。首先,以本实验室已制备的兔抗人PML多克隆抗体为基础,通过免疫荧光方法检测抗体的特异性:瞬时转染pCMV-Myc-PML到Hela细胞,和santacruz的PML单抗对比后,表明该抗体具有较高的识别特异性。其次,利用免疫荧光和western blot方法检测PML核体和SUMO-1/2的共定位及SUMO-1/2对PML的修饰:(1)瞬时共转染pCMV-HA-PML/pCMV-Myc-SUMO-1,pCMV- HA-PML/pCMV-Myc-SUMO-2到Hela细胞,收集细胞用免疫荧光检测PML核体的亚细胞结构定位及SUMO-1/2和PML核体的共定位;(2)瞬时共转染pCMV-Myc-PML/pYFP- C1-SUMO-1,pCMV-Myc-PML/pYFP-C1-SUMO-2到Hela细胞,western blot检测SUMO- 1/2对PML的修饰,结果表明SUMO-1/2对PML的修饰有所不同。接着,用药物阻断细胞同步化的方法将Hela细胞阻断在细胞周期的各个不同阶段,研究内源性的PML和SUMO-1/2的共定位,发现共定位情况有较大不同。最后,瞬时共转染pGFP-C1-PML/pDsRed-C1-RNF4,pGFP-C1-SUMO-1/pDsRed-C1- RNF4,pGFP-C1-SUMO-1/pDsRed-C1-RNF4到Hela细胞,荧光显微镜检测均有共定位。