曲马多与电针合用治疗慢性炎症痛的神经生物学机制研究慢性疼痛是临床上常见病症，长期实践证明针刺镇痛是一种有效的镇痛方法，在临床上被广泛应用。对电针镇痛的机理研究揭示，电针是通过激活机体内源性痛觉调制系统，如内源性阿片肽和5-HT下行抑制系统而起镇痛作用。为了进一步提高镇痛效果，推广电针的临床应用，本实验室以往工作表明，一些药物与电针合用可以加强电针的镇痛作用。针药结合既提高镇痛效果，又能减少药物用量，是一种较为理想的方法。曲马多是一种“非典型”阿片类中枢镇痛药物，对术后伤口痛、神经痛等多种慢性疼痛均有镇痛作用。曲马多与(阿片受体亲和力比吗啡低6000倍，但镇痛作用只比吗啡低5－10倍，提示曲马多具有其他作用机制。曲马多的非阿片镇痛机制主要是促进单胺类神经递质5－羟色胺（5-HT）和去甲肾上腺素（NE）的释放并抑制突触间隙5-HT和NE重吸收，从而起镇痛作用。既然曲马多和电针均是通过阿片肽系统和5-HT系统起作用，那么当两者合用时曲马多是否能加强电针镇痛，从而达到更强的镇痛效果呢？国内外至今未见系统报道。已知5-HT系统在内源性痛觉调制中起重要作用，其中5-HT 2A受体mRNA在脑内与痛觉调制有关的核团及脊髓背角内均有表达。本室以往工作表明角叉菜致炎后5-HT 2A受体mRNA明显增高，表明5-HT 2A受体参与急性炎症痛过程。那么大鼠单侧踝关节腔内注射完全弗氏佐剂（CFA），形成单发性关节炎引起慢性炎症痛时中枢5-HT 2A受体会发生怎样的改变？多次应用曲马多和电针后对5-HT 2A受体会产生什么影响？此外，以往文献证实电针可以促进5-HT合成和释放，而曲马多能抑制5-HT重吸收，那么，多次应用曲马多和电针对5-HT合成有何影响呢？孤啡肽（OFQ）是近年来发现的一种阿片肽（17肽），我们实验室以往研究表明OFQ在机体痛觉调制中有重要作用，参与急性炎症痛及神经痛过程,并参与针刺镇痛。那么OFQ在慢性炎症痛时有何变化呢？此外，长期应用曲马多或电针治疗对OFQ有何影响？以及5-HT系统对OFQ合成释放是否有影响？这些尚未见报道。有实验表明cAMP依赖的蛋白激酶（PKA）参与炎症痛的发生及维持，但曲马多和电针镇痛作用的细胞内信号转导机制是否通过cAMP-PKA途径目前尚<WP=7>不清楚。本工作拟采用大鼠单侧踝关节腔内注射CFA，形成单发性关节炎大鼠模型。该模型注药后几小时踝关节即出现红肿并可持续6周以上，关节局部痛敏明显，是一种稳定的慢性痛动物模型。本实验在该动物模型上，行为学实验采用辐射热缩腿反射方法观察关节炎大鼠痛敏反应，明确曲马多和电针对关节炎大鼠的镇痛作用（包括单次给予曲马多或电针的即刻效应，及多次给予曲马多或电针的累加效应）。进而采用原位杂交、免疫组化、荧光双标、RT-PCR及Western-Blot等分子生物学技术，分析这两者对中枢5-HT系统和OFQ系统的影响以及细胞内信号转导途径，从而为阐明针药结合镇痛的中枢机理提供新的理论依据。实验结果如下：1. 曲马多和电针对关节炎大鼠的镇痛作用观察采用辐射热缩腿反射方法观察CFA关节炎大鼠痛敏分数的变化。1.1.单次腹腔注射不同剂量曲马多对关节炎大鼠的镇痛作用32只关节炎大鼠随机分为四组：NS组，Tra5，Tra10和Tra20组，于造模后第四天分别腹腔注射（i.p.）NS，5，10，20 mg/ kg曲马多，给药后0，30，60，120，240分钟测痛，计算痛敏分数。结果表明：Tra10组和Tra20组可剂量相关地提高关节炎大鼠的痛敏分数，有明显的镇痛效应。1.2.单次曲马多与电针合用对关节炎大鼠的镇痛作用32只关节炎大鼠随机分为四组，于造模后第四天分别 i.p. NS（NS），i.p.10 mg/ kg曲马多（Tra10），30min电针（EA）及曲马多和电针合用（EA＋Tra），给药后0，30，60，120，240分钟测痛，计算痛敏分数。结果表明：EA＋Tra组镇痛作用最强，提示曲马多可加强针刺镇痛。1.3.多次腹腔注射不同剂量曲马多对关节炎大鼠的镇痛作用32只关节炎大鼠随机分为四组：NS组，Tra5，Tra10和Tra20组，于造模后第四天起分别i.p. NS，5，10，20 mg. kg-1. d-1曲马多连续10天，于每次给药后24小时测痛，计算痛敏分数。结果表明：10和20 mg. kg-1. d-1曲马多连续应用10天可剂量相关地提高关节炎大鼠的痛敏分数，有明显的累加镇痛效应。1.4.多次曲马多和电针合用对关节炎大鼠的镇痛作用32只关节炎大鼠随机分为四组，于造模后第四天起分别i.p. NS（NS），i.p. 10 mg.kg-1.d-1曲马多（Tra10）、30min/d电针（EA）及曲马多与电针合用（EA＋Tra）连续10天，于每次给药后24小时测痛，计算痛敏分数。结果表明电针8天后痛敏分数明显提高，应用曲马多9天痛敏分数明显提高，而曲马多与电针合用4天即可明显提高大鼠痛敏分数。表明EA＋Tra组累加镇痛效果显著优于Tra<WP=8>组和EA组，提示曲马多可加强针刺镇痛。小结：单次或多次腹腔注射曲马多均有镇痛作用，且呈剂量相关性。单次或多次应用电针对关节炎大鼠均显示有镇痛作用。小剂量曲马多与电针合用，无论是即刻效应还是累加效应均能达到更强的镇痛作用。2. 曲马多和电针对关节炎大鼠中枢5-HT系统的影响2.1.曲